申克孢子丝菌STE20基因RNA干扰菌株的构建方法

发布时间：2022-12-04 23:40

　　目的构建真菌通用的RNA干扰载体,以广泛用在多种真菌基因干扰的研究中。方法利用现有的植物双元表达载体进行改造,将pBlueScriptⅡ的多克隆位点（MCS）酶切下来构建干扰载体;为使载体适于农杆菌转化,加入T-DNA边界重复序列;为便于转化后的筛选,将潮霉素抗性基因构建到干扰载体上。改造以前的干扰载体仅适于青霉菌属的RNA干扰,为扩大干扰范围,扩增pSilent-1质粒中的真菌通用启动子Ptrpc,间隔序列和终止子Ttrpc,并引入潮霉素抗性基因,使其在间隔序列两侧加上目的基因的正反向干扰序列以构建载体。结果利用本实验构建的载体PCB309-PSUST及优化的反应体系成功实现了对孢子丝菌STE20基因的有效干扰,操作简便、转化效率高、转化子稳定。结论成功构建的这种载体适于根癌农杆菌介导,能够对多种丝状真菌基因进行RNA干扰研究用。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验方法
2 结 果
    2.1 RNA干扰载体pCB309-PSUST的构建
3 讨 论


【参考文献】：
博士论文
[1]组氨酸激酶在马尔尼菲青霉菌中的功能研究[D]. 王峰.沈阳药科大学 2009



本文编号：3709218