Rock可能通过抑制PI3K/Akt通路促进缺氧诱导的心肌细胞凋亡

发布时间：2023-01-29 18:58

　　目的:通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用。方法:（1）原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定。（2）利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1 h、3 h、6 h、9 h,以正常氧培养的心肌细胞作为对照。（3）用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTT检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表达情况。结果:（1）缺氧1 h、3 h、6 h、9 h后,心肌细胞凋亡率分别为（8.76±1.51）%、（15.36±2.34）%、（26.50±3.43）%、（41.96±4.22）%,与对照组[2.60±0.34)%]比较均有显著差异（P＜0.01）;存活率分别为（93.20±4.12）%、（86.14±3.10）%、（75.53±7.25）%、（60.21±6.75）%,与对照组[（97.60±1.12）%]比较均有显著差异（P＜0.05）。（2）ROCK-1和ROCK-2缺... 

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【文章目录】：
材料和方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 原代心肌细胞的培养及鉴定
        2.2 心肌细胞缺氧模型制备及各种条件培养
        2.3 MTT法检测心肌细胞成活率
        2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡率
        2.5 全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶 (lactate de-hydrogenase, LDH)
        2.6 Western blotting
    3 统计学处理
结果
    1心肌细胞的鉴定
    2心肌细胞存活率、凋亡率及上清液LDH的变化
    3 心肌细胞中ROCK-1、ROCK-2蛋白表达
    4 心肌细胞中PI3K和p-PI3K的表达
    5 缺氧后心肌细胞中caspase-3蛋白表达
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]rAAV1-SERCA2a转染改善心力衰竭犬心功能及其机制探讨[J]. 米亚非,李小鹰,江建军,付治卿,鲁晓春.  中国病理生理杂志. 2014(02)



本文编号：3732783