间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体重链CDR3随机突变哺乳动物细胞表面展示文库的构建

发布时间：2023-02-23 19:54

　　目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体3E1D7的重链补体决定区3(CDR3)随机突变抗体库。方法用定向进化的方法在嵌合抗体3E1D7重链CDR3内部造成基因随机突变,将其通过双酶切克隆到哺乳动物细胞展示载体pSZI-CD中构建随机突变抗体库。抗体库基因转染CHO细胞,流式细胞术检测抗体基因是否在细胞表面表达。结果 3E1D7重链CDR3随机突变抗体库构建成功,库容量达到5.52×10⁶。随机挑选20个阳性克隆进行测序鉴定, 20个克隆均在不同位置发生碱基突变且没有重复突变,编码20种不同的氨基酸序列,抗体库具有较好的多样性和随机性。流式细胞术分析抗体基因库上膜情况,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达。结论通过哺乳动物细胞表面展示技术,成功构建了库容量达到5.52×10⁶的c-Met嵌合抗体重链CDR3随机突变抗体库。

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 构建嵌合抗体3E1D7重链CDR3随机突变抗体库
        1.2.2 转染CHO抗体展示细胞系
        1.2.3 流式细胞术检测抗体在CHO细胞表面的表达
2 结果
    2.1 3E1D7重链CDR3随机突变抗体基因的扩增
    2.2 随机突变抗体基因纯化和酶切处理
    2.3 嵌合抗体3E1D7的CDR3随机突变抗体库具有较好的多样性和随机性, 库容量达到5.52×106
    2.4 转染后抗体在细胞表面表达
    2.5 潮霉素筛选后细胞表面抗体表达增加
3 讨论



本文编号：3748649