ERK5和JNK参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化

发布时间：2023-03-07 18:40

　　目的研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法利用重组腺病毒将BMP9基因导入C3H10T1/2细胞,Western blot法检测加入BMP9及不同浓度ERK5特异性抑制剂BIX02189或JNK特异性抑制剂SP600125后ERK5和JNK的激活情况;实时定量PCR(qRT-PCR)检测BMP9诱导1周后心肌特异性基因肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA结合蛋白4(GATA4)表达;Western blot法检测经BMP9诱导3周后心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43(CX43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达和免疫荧光技术检测CX43、cTnT在细胞内的表达。结果在转染效率达50%左右的情况下,BMP9可过度激活ERK5和JNK,使其磷酸化水平显著增高(P<0.05);BIX02189抑制ERK5激活后,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的心肌分化标志物MEF2C、GATA4、CX43、cTnT均受到显著抑制(P<0.05),JNK特异性抑制剂SP600...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1细胞培养
        1.2.2 Western blot法检测p-ERK5、t-ERK5、p-JNK、t-JNK表达
        1.2.3 qRT-PCR检测心肌特异性基因GATA4、MEF2C表达
        1.2.4 Western blot法检测心肌特异性蛋白c Tn T和CX43表达
        1.2.5免疫荧光技术定位c Tn T、CX43在细胞内的表达
        1.2.6统计学分析
2 结果
    2.1 C3H10T1/2细胞转染及生长情况
    2.2 Western blot法检测BMP9对ERK5和JNK激酶的激活情况及抑制剂处理后的变化
    2.3 qRT-PCR检测心肌特异性基因MEF2C、GATA4表达
    2.4 Western blot法检测心肌特异性蛋白c Tn T和CX43表达
    2.5 免疫荧光观察c Tn T、CX43的定位
3 讨论



本文编号：3757685