人干扰素ε的克

发布时间：2023-03-29 00:45

　　人干扰素ε是新近克隆的又一新型干扰素家族成员，对其结构和功能目前知之甚少。本研究从人胚胎的肺脏、肝脏、心脏和手四种器官中提取总RNA，利用RT-PCR技术对IFN-ε mRNA在不同组织中的表达分布进行了分析；同时应用酶切连接将获得的IFN-ε目的基因片段插入表达载体pBV220中，转化大肠杆菌DH5α进行表达，发酵扩增培养后纯化，得到纯度高达90％以上的纯品，并进行了IFN-ε抗病毒活性的鉴定。 1、IFN-ε mRNA在人胚胎组织中的分布 利用RNA提取试剂TRIZOL LS Reagent从人胚胎的肺脏、肝脏、心脏和手四种组织中提取总RNA，以看家基因β-actin作为系统内参照，通过RT-PCR技术分析IFN-ε mRNA在不同组织的分布情况，结果表明IFN-ε mRNA在胚胎的肺脏和肝脏中有较高水平的表达，而在心脏和手中几乎没有表达或表达量很低。 2、IFN-ε的表达与纯化 RT-PCR扩增得到的IFN-ε基因经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切后，插入同样处理的温控型载体质粒pBV220中，转化大肠杆菌DH5α，42℃诱导表达后用12％聚丙烯酰胺...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
前言
材料与方法
    1 材料
        1.1 载体与菌株
        1.2 细胞与病毒
        1.3 酶和试剂
    2 方法
        2.1 IFN-ε mRNA在人胚胎中的组织分布
        2.2 目的基因重组表达载体的构建和鉴定
        2.3 序列测定与分析
        2.4 基因工程重组表达菌的诱导表达
        2.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
        2.6 表达产物纯化
        2.7 IFN-ε抗病毒活性的测定
结果与分析
    1 IFN-ε mRNA在人胚胎中的组织分布
    2 重组表达载体的构建与鉴定
    3 IFN-ε的测序结果
    4 基因工程重组菌的诱导表达和SDS-PAGE分析
    5 表达产物的纯化与鉴定
    6 IFN-ε抗病毒活性的测定
讨论
    1 IFN-ε mRNA在人胚胎中的组织分布
    2 发酵表达
    3 产物纯化
    4 生物学性质
结论
参考文献
附录
文献综述



本文编号：3773637