EB病毒蛋白BNLF2a阻止抗原转运蛋白TAP的构象变化

发布时间：2023-04-02 11:59

　　【背景】EB病毒是一个常见的病原,它能引起霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤以及胃癌、鼻咽癌。该病毒编码的膜蛋白BNLF2a抑制抗原转运蛋白TAP (Transporter associated with antigen processing)从而逃逸T细胞的清除。TAP属于ABC(ATP-bindingcassette)转运蛋白超家族,是由TAP1和TAP2两个亚基构成的。TAP通过ATP提供能量,跨膜转运抗原多肽,这一过程伴随着构象变化。【目的】旨在揭示BNLF2a是否影响TAP的构象变化。【方法】TAP蛋白核酸结合结构域的二聚体界面的D-loop进行点突变,引入半胱氨酸。在表达和不表达BNLF2a情况下,采用氧化性的二价铜离子交联半胱氨酸,并通过Westernblot对比TAP的半胱氨酸形成二硫键的比例。【结果】BNLF2a表达使TAP被交联的比例增高。【结论】BNLF2a可能将TAP稳定在核苷酸结合结构域二聚化的构象,从而同时抑制ATP和抗原多肽结合到TAP上来。

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 突变株的构建与表达
        1.2.2 sf9昆虫细胞转染及杆状病毒扩增与表达
        1.2.3 膜蛋白的提取
        1.2.4 肽结合检测
        1.2.5 肽转运检测
        1.2.6 半胱氨酸交联
        1.2.7 免疫共沉淀
2 结果与分析
    2.1 TAP蛋白同源的ABC转运蛋白的结构分析
    2.2 TAP突变株的表达
    2.3 BNLF2a抑制TAP突变株的多肽结合活性和转运活性
    2.4 TAP突变株ATP结合结构域的二聚化
    2.5 BNLF2a促进TAP突变株二硫键交联
    2.6 BNLF2a 1-39抑制TAP突变株的活性
3 讨论与结论



本文编号：3779184