TgMIC6的优化表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2023-04-12 03:48

　　目的原核表达弓形虫微线体蛋白6(TgMIC6)结构功能域,并制备其多克隆抗体。方法运用Optigene TM密码子优化分析平台对弓形虫MIC6(TgMIC6)功能区的编码序列进行密码子优化,合成优化后的编码基因,并将其克隆入pET30a原核表达载体,构建pET30a-MIC6重组质粒;重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,经His亲和层析纯化后以His单克隆抗体为一抗进行Western blot鉴定。用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,抗体纯化后分别运用ELISA和Western blot对其效价和特异性进行分析。结果成功构建了pET30a-MIC6原核表达载体。表达的TgMIC6融合蛋白相对分子质量为45×10³,与预期相符,纯化后浓度为0.5 mg/ml。以纯化的融合蛋白为抗原制备兔源性抗血清,ELISA测定其效价为1∶25 600,抗体浓度3.2 mg/ml,纯度>90%,Western blot显示该抗体能识别TgMIC6重组蛋白和不同虫株内的天然MIC6蛋白。结论优化后的TgMIC6功能区在原核表达系统...

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
    2 方法
        2.1 TgMIC6密码子优化和TgMIC6原核表达载体的构建和鉴定
        2.2 重组质粒的诱导表达
        2.3 重组蛋白的大量表达
        2.4 重组蛋白的纯化及鉴定
        2.5 多克隆抗体的制备及纯化
        2.6 TgMIC6多克隆抗体特异性鉴定
结 果
    1 TgMIC6基因密码子的优化
    2 pET30a-MIC6重组质粒的鉴定
    3 重组质粒的诱导表达及鉴定
    4 融合蛋白的纯化
    5 TgMIC6多克隆抗体的制备及纯化
    6 TgMIC6多克隆抗体的特异性验证
讨 论



本文编号：3790366