DNAzyme/LNAzyme切割RNA反应动力学实时分析体系的建立及在细胞内阻断丙型肝炎病毒基因表达的实验研究

发布时间：2023-05-17 20:26

　　自从核酶这一具有催化活性的RNA分子被发现以后,国内外研究者自然地将目光转向另一类生物大分子—DNA,力图寻找和证实一类具有催化功能的DNA分子。具有10-23基序的DNAzyme是一种高效且广泛催化RNA切割反应的单链DNA分子,它是体外选择(invitro selection)实验过程的第10轮次筛选出的第23号克隆,称之10-23 DNAzyme。它由15个脱氧核糖核苷酸(5’GGCTAGCTACAA CGA3’)构成催化结构域,两侧分别有由7-8个脱氧核糖核苷酸构成的底物识别结构域。通过其两侧的底物识别序列与RNA底物通过Watson-Crick碱基配对而特异结合。其切割位点位于RNA分子上的未配对的嘌呤(R=A或G)和已配对的嘧啶(Y=U或C)之间。通过合理设计DNAzyme底物认别部位的核苷酸序列,可对不同的靶RNA分子进行切割。近来研究又发现,通过对DNAzyme的底物识别序列进行一定的化学修饰如在其识别结构域上引入几个LNA(locked nucleic acid)单体,可显著增强其化学结构的稳定性和切割效率,称之为LNAzyme。 由于DNAzyme/LNAzyme...

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

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研究流程图
第一部分：DNAzyme／LNAzyme切割RNA反应动力学实时分析体系的建立
    一、DNAzyme／LNAzyme对RNA的切割及反应动力学实时分析
    二、影响DNAzyme／LNAzyme切割RNA反应动力学的因素
第二部分：DNAzyme／LNAzyme在细胞内阻断丙型肝炎病毒基因的表达
    一、HCV-UTR／C126-EGFP融合蛋白真核表达质粒的构建与鉴定
    二、稳定表达HCV-NTR／C126-EGFP的HepG₂细胞系的筛选与鉴定
    三、DNAzyme／LNAzyme阻断丙型肝炎病毒基因表达的细胞内效应
小结
文献综述：DNAzyme及LNAzyme研究进展
参考文献
附录
致谢



本文编号：3817944