狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备

发布时间：2023-09-17 16:18

　　目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经亲和层析和复性后,免疫豚鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA检测多抗的免疫反应性以及效价。结果成功构建了pET-28b-M重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,经亲和层析及透析获得纯化的重组M蛋白,制备的多克隆抗体可与M蛋白发生特异性结合,效价达1∶21 870。结论成功优化表达了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制备了高效价的多克隆抗体,为后续M蛋白生物学分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基础。

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒、细菌及病毒
    1.2 实验动物
    1.3 主要试剂
    1.4 重组M蛋白表达载体的构建
    1.5 目的基因的诱导表达
    1.6 目的蛋白的纯化及复性
    1.7 重组M蛋白含量测定
    1.8 多克隆抗体的制备
    1.9 抗M蛋白多克隆抗体的Western blot分析
    1.1 0 抗M蛋白多克隆抗体的效价检测
2 结果
    2.1 重组表达质粒pET-28b-M的鉴定
    2.2表达产物的鉴定
    2.3 纯化产物的鉴定
    2.4 多克隆抗体的Western blot分析
    2.5 多克隆抗体的效价
3 讨论



本文编号：3847774