重组人IL-12病毒去除/灭活工艺的建立及验证

发布时间：2023-10-08 19:35

　　目的建立重组人白细胞介素-12(recombinant human IL-12,rhIL-12)的病毒去除/灭活工艺,并进行验证。方法采用预过滤器(Viresolve Shield,纳米滤膜3.1 cm2)和除细小病毒过滤器(Viresolve Pro,纳米滤膜3.1 cm2)串联过滤,样品体积为90 ml,过滤时间为2 h,安全系数为1.88,压力为30 psi,建立rhIL-12病毒去除工艺,分析该工艺对产品的比活性及回收率的影响,并以猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)作为指示病毒,对该工艺进行病毒去除效果验证;采用低pH孵放法(用1 mol/L HCl调pH值至3.8±0.1,室温放置180 min后,用1 mol/L NaOH调pH值至7.4)建立rhIL-12病毒灭活工艺,分析该工艺对产品的蛋白含量及比活性的影响,并分别以水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,对该工艺进行病毒灭活效果验证。结果纳米膜串联过滤病毒去除工艺中,蛋白回收率为95...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒及细胞
    1.2 rh IL-12
    1.3 主要仪器
    1.4 膜过滤病毒去除工艺的建立及验证
        1.4.1 膜过滤去除病毒工艺的建立
        1.4.2膜过滤去除病毒工艺对rh IL-12的比活性及回收率影响的检测
        1.4.3 膜过滤去除病毒工艺效果的验证
            1.4.3. 1 病毒滴定
            1.4.3. 2 病毒去除效果验证
    1.5 低p H孵放法病毒灭活工艺的建立及验证
        1.5.1 低p H孵放法病毒灭活工艺的建立
        1.5.2 低p H孵放法病毒灭活工艺对rh IL-12的蛋白含量及比活性影响的检测
        1.5.3 低p H孵放法病毒灭活工艺的效果验证
            1.5.3. 1 病毒滴定
            1.5.3. 2 病毒灭活效果验证
2 结果
    2.1 rh IL-12病毒去除工艺的建立及验证
        2.1.1 膜过滤去除病毒工艺对rh IL-12的比活性率收率的影响
        2.1.2 膜过滤去除病毒工艺效果的验证结果
    2.2 rh IL-12病毒灭活工艺的建立及验证
        2.2.1 低p H值对rh IL-12生物活性和蛋白含量的影响
        2.2.2 低p H孵放法病毒灭活工艺效果的验证结果
3 讨论



本文编号：3852655