埃博拉病毒糖蛋白GP1亚基融合蛋白的真核表达与纯化

发布时间：2023-10-29 17:45

　　埃博拉病毒糖蛋白与病毒黏附、入侵宿主细胞等过程密切相关,为了更好地研究该糖蛋白与宿主细胞的相互作用,拟通过哺乳动物细胞表达系统,构建GP1亚基Fc标签融合蛋白。经鉴定,成功构建了埃博拉病毒糖蛋白GP1亚基的真核表达载体pFUSE-GP1-hIgG1-Fc2,并利用该载体及293T细胞构建了表达GP1亚基融合蛋白的哺乳动物细胞系。该融合蛋白N端带有IL2分泌信号肽,C端带有人IgG1-Fc2标签,可在293T细胞以分泌表达的方式存在于细胞培养上清中,而后利用Protein A亲和层析进行融合蛋白纯化。经Western Blots鉴定,成功制备GP1-Fc融合蛋白。这不仅为埃博拉病毒糖蛋白的研究提供了技术支撑,也为其他种类蛋白的哺乳动物细胞真核表达纯化提供了新思路。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 蛋白质序列分析
    1.3 GP1片段选取及引物设计
    1.4 GP1片段的扩增与连接
    1.5 重组质粒阳性克隆菌落鉴定及重组质粒扩增
    1.6 Zeocin筛选与维持浓度的确定
    1.7 Zeocin转染后表达细胞的筛选
    1.8 细胞系的扩增及蛋白表达纯化
    1.9 目的蛋白的鉴定
2 结果与分析
    2.1 利用ExPASy 对蛋白质进行序列分析和性质分析
    2.2 质粒pFUSE-GP1-hIgG1-Fc2的构建
    2.3 表达GP1-Fc蛋白细胞系的构建
    2.4 Protein A亲和层析纯化
3 讨 论



本文编号：3858558