噬菌体抗体库技术筛选抗VEGF165单克隆抗体

发布时间：2024-02-04 21:50

　　目的:获得抗血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并对其功能进行初步验证。方法:利用噬菌体抗体库展示技术筛选与VEGF165结合的噬菌体克隆并测序,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,PCR扩增抗体的轻重链可变区基因,并克隆至哺乳动物细胞表达载体中,构建全抗体表达载体;将全抗体表达载体转染293E细胞,收取培养细胞上清,利用Protein A亲和纯化抗体;通过结合ELISA、表面等离子共振检测抗体的亲和力,以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为模型验证抗体功能。结果:经过噬菌体抗体库展示技术筛出1个与VEGF165特异性结合的抗体序列VG2;293E细胞表达了VG2全抗体蛋白,SDS-PAGE显示VG2抗体纯度较高;BIAcore检测结果表明该抗体具有较高亲和力(KD=0.56 nmol/L),竞争抑制ELISA结果表明VG2抗体能抑制VEGF与VEGF受体(VEGFR)的结合(IC50为1.470μg/mL),进一步实验结果表明VG2能够抑制VEGF引起的HUVEC增殖。结论:制备了靶向VEGF165的全人源单克隆抗体VG2,该抗体具有较高的亲和力,能阻断VEGF165/VEG...

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【部分图文】：

图1ELISA检测噬菌体-抗体结合曲线5

图3SDS-PAGE鉴定VG2抗体M：Beyotime彩色预染蛋白质marker（P0068）；1：还原电泳；2：非还原电泳

（图6）。2.7HUVEC增殖抑制检测VG2抗体的功能HUVEC主要用于研究血管生成相关功能实验。VEGF165作用于HUVEC，可引起该细胞的增殖，因此可以利用该模型评价VG2抗体的功能。将HUVEC接种于细胞培养板中，过夜培养，向细胞中加入不同浓度的VG2抗体与VEGF165....

图4ELISA检测全抗体结合曲线

图5竞争ELISA检测全抗体结合曲线

sm绘制抗原抗体结合曲线（图4），VG2抗体与VEGF165抗原结合的半数效应浓度（EC50）为6.455ng/mL。2.5竞争ELISA检测VG2抗体的功能ELISA检测VG2阻断VEGF165与VEGFR结合的能力。将VG2抗体进行1/3梯度稀释，然后与VEGFR混合，将混合....

本文编号：3895882