结核分枝杆菌多表位诊断抗原的制备

发布时间：2024-02-06 21:50

　　将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)多个B细胞预测表位串联表达(命名为B102),并初步评价其作为诊断抗原的血清学诊断价值。将MtbPstS1、ESAT6、CFP10、Ag85B、Ag85A及PPE54等6个蛋白的11个B细胞预测表位串联,加入合适的连接臂后全基因合成;将多表位片段插入带有TRX标签的表达质粒中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并利用Ni²⁺-Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blotting (WB)技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立Mtb抗体检测竞争法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白的31.25%,经纯化及复性后蛋白B102可溶性存在,浓度为3.124mg/mL,纯度为96.71%;WB实验表明目的蛋白能与Mtb阳性血清相应抗体发生反应。对60份Mtb阳性血清及60份Mtb阴性血清进行检测得出其灵敏度为90.00%,特异性为93.33%,阳性预测值为93.10%,阴性预测值...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料与试剂
    1.2 表达质粒B102的构建
    1.3 蛋白B102的制备
    1.4 蛋白B102的Western blotting分析
    1.5 蛋白B102诊断效能的评价
    1.6 统计学分析
2 结果与分析
    2.1 原核表达和层析纯化可获取高度均质的蛋白B102
    2.2 蛋白B102可以与Mtb阳性血清发生特异性反应
    2.3 基于蛋白B102的竞争法ELISA技术可以很好地鉴别Mtb阴阳性血清标本
3 讨论



本文编号：3896246