树鼩干细胞生长因子的原核表达、纯化及免疫原性

发布时间：2024-02-14 15:46

　　目的原核表达、纯化树鼩干细胞生长因子(stem cell factor,SCF),并检测其免疫原性。方法根据GenBank预测的树鼩SCF基因序列设计引物,PCR扩增SCF基因,克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-SCF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,免疫家兔,Western blot和ELISA法检测其免疫原性,并检测SCF在树鼩不同组织中的分布情况。结果重组表达质粒pET-30a(+)-SCF经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为34 500,表达量约占菌体总蛋白的35. 6%,以包涵体形式存在;纯化后的重组蛋白纯度达90%以上,可与兔抗人SCF多克隆抗体特异性结合,且免疫原性良好,抗血清效价为1∶256 000。在鼻、气管、肺、脾、肾、食管中能检测到SCF的分布。结论在大肠埃希菌中高效表达了重组SCF蛋白,纯化复性后具有良好的免疫原性。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株及载体
    1.2 实验动物
    1.3 主要试剂及仪器
    1.4 SCF基因的扩增及重组表达质粒的构建
    1.5 目的基因的诱导表达
    1.6 表达产物的Western blot鉴定
    1.7 目的蛋白的纯化
    1.8 SCF蛋白的免疫原性检测
    1.9 SCF在树鼩不同组织中分布的检测
2 结果
    2.1 SCF基因扩增产物及重组表达质粒的鉴定
    2.2 表达产物的鉴定
        2.2.1 SDS-PAGE分析
        2.2.2 Western blot分析
    2.3 纯化产物的鉴定
    2.4 目的蛋白的免疫原性
    2.5 SCF在树鼩不同组织中的分布
3 讨论



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