Cu 2+ 胁迫对福寿螺金属硫蛋白基因mRNA表达的影响

发布时间：2024-02-20 17:15

　　探讨不同浓度Cu²⁺胁迫对福寿螺肝胰腺组织金属硫蛋白(metallothionein, MT)基因表达的影响,取15只福寿螺,在100μg/L Cu²⁺离子胁迫后的0、 1、 7、 14、 21 d,各取3只福寿螺,分离肝脏,提取RNA,反转录为c DNA,实时荧光定量PCR检测福寿螺金属硫蛋白基因(Pc MT) mRNA的相对表达水平。以cDNA为模板, PCR扩增Pc MT基因完整编码序列,连接至pET28a质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞中,挑取阳性克隆进行鉴定与测序。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物。结果显示, Cu²⁺胁迫0～14 d,福寿螺肝脏中Pc MT基因mRNA的表达量持续上升,峰值为2.1±0.2, 21 d时下降为1.1±0.1。PCR扩增Pc MT基因,获得长度约300 bp的片段,构建的pET28a-Pc MT质粒经PCR、双酶切和测序鉴定,均与预期大小一致。SDS-PAGE结果显示, Pc MT...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 福寿螺来源
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 Cu2+胁迫对肝脏中Pc MT mRNA相对表达量的影响
    1.4 Pc MT基因的原核表达
    1.5 统计学分析
    1.6 伦理批准和知情同意
2 结果
    2.1 Cu2+胁迫对肝脏中Pc MT mRNA相对表达量的影响
    2.2 Pc MT基因PCR扩增结果
    2.3 pET28a-Pc MT重组质粒的鉴定
3 讨论



本文编号：3904335