人细小病毒B19中国株NS蛋白基因克隆及序列分析

发布时间：2024-02-22 12:24

　　目的：人细小病毒B19(Human Parvovirus B19，以下简称B19病毒)是一种可致人类多种疾病的小DNA病毒，主要经呼吸道和血液途径传播，可引起社区局部流行。诸多研究表明B19病毒可能与一过性再障危象、传染性红斑、急性血小板减少性紫癜及非免疫性胎儿水肿等疾病相关。B19病毒在我国人群中也有较高的感染率，尤其免疫功能低下或缺陷患者可发生持续感染和慢性贫血，重者危及生命。B19病毒是由5.6kb核苷酸组成，编码一个非结构蛋白(NS)和两个结构蛋白(VP1、VP2)。近年国外研究发现B19病毒不同地区流行株之间的基因有明显变异。B19病毒NS蛋白具有细胞毒性，可诱导靶细胞凋亡，其变异与B19病毒致病力密切相关。国内对于B19 第四军医大学硕士学位论文 病毒NS基因变异研究较少。近年来分子克隆技术的发展突飞猛进， 分子克隆的方法亦多种多样，特别是PCR技术的应用，使得分于克 隆技术的应用日益...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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前言
文献回顾
    一、 B19病毒的发现及其特征
    二、 B19病毒与人类疾病
    三、 B19病毒的研究方法
    四、 B19病毒基因变异研究
    五、 NS基因及蛋白的研究
材料和方法
    Ⅰ 材料
        一、 研究对象
        二、 病毒来源
        三、 试剂
        四、 主要仪器设备
        五、 几种有关化学试剂的配制
    Ⅱ 方法
        一、 血标本DNA提取
        二、 PCR反应及结果观察
        三、 基因克隆
            （一） PCR产物的纯化
            （二） 大肠杆菌JM109的增菌
            （三） 大肠杆菌JM109感受态的制备
            （四） DNA片段添A反应
            （五） NS基因目的片段与pGEM-T载体的连接
            （六） 重组DNA的转化
            （七） 质粒的提取
            （八） 酶切及鉴定
        四、 核苷酸测序
结果
    一、 PCR扩增HPV B19 NS基因的结果
    二、 HPV B19 NS测序结果
    三、 HPV B19 NS-pGEM-T、NSD-pGEM-T重组质粒的构建
讨论
    一、 B19病毒基因变异性及其流行病学意义
    二、 B19病毒基因克隆技术的建立及其应用价值
小结
致谢
参考文献
附图



本文编号：3906753