降钙素基因相关肽促进体外培养的神经干细胞向神经元分化

发布时间：2017-05-25 19:18

  本文关键词：降钙素基因相关肽促进体外培养的神经干细胞向神经元分化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探索降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)对体外培养的新生小鼠室管膜下区神经干细胞增殖和分化的影响。方法:分离新生小鼠室管膜下区组织,经机械法和酶消化法制成单细胞悬液,抗SOX-2和抗Nestin免疫荧光染色,鉴定分离培养的细胞。以未添加b FGF和EGF的无血清培养基诱导神经干细胞分化。取体外培养至第3代的神经干细胞,分为4组,分别为对照组、1n M CGRP组、10n M CGRP组、100n M CGRP组。MTT法寻找体外培养神经干细胞最佳的增殖时间,Brd U标记法和神经球体积测量法来检测各组之间神经干细胞增殖能力的差异。采用免疫细胞化学染色方法来标记神经元(Neuronal class IIIβ tubulin,Tuj-1)、星形胶质细胞(Glial fibrillary acidic protein,GFAP),并分别统计体外诱导分化培养3天、7天各组之间Tuj-1阳性细胞占总细胞数的比例,进而比较不同体外培养时间各组之间神经干细胞向神经元分化的能力的强弱。结果:MTT法提示体外培养4天神经干细胞增殖能力最强。体外培养4天时,各组之间的Brd U阳性细胞数及神经球体积无明显差异。体外诱导分化3天,对照组、1n M CGRP组、10n M CGRP组、100n M CGRP组中Tuj-1的百分比分别为(26.1±5.1)%,(28.1±6.1)%,(34.7±4.8)%及(56.0±5)%,其中100n M CGRP组中Tuj-1的百分比相对于其他3组明显升高(P0.05);而体外诱导分化7天,对照组、1n M CGRP组、10n M CGRP组、100n M CGRP组中Tuj-1的百分比依次为(45.4±4.2)%,(53.8±4.3)%,(70±2.6)%和(48.8±4.1)%,其中10n M CGRP组中Tuj-1的百分比相对于其他3组明显升高(P0.05)。结论:CGRP无明显促进体外培养的神经干细胞的增殖作用,但是可以促进体外培养的神经干细胞向神经元分化,而且这种促分化作用具有浓度及时间依赖性。
【关键词】：降钙素基因相关肽 室管膜下区 神经干细胞 增殖 分化
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 序言8-11
• 参考文献9-11
• 1 实验材料11-14
• 2 实验方法14-18
• 3 实验结果18-23
• 4 讨论23-27
• 全文结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述32-46
• 参考文献40-46
• 中英文缩略词对照46-47
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文47-48
• 致谢48-49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 熊建文;肖化;张镇西;;MTT法和CCK-8法检测细胞活性之测试条件比较[J];激光生物学报;2007年05期

2 叶建亚;李聪慧;唐蔚东;马常升;郝庆卯;秦永;;巢蛋白及性别决定基因高迁移率组蛋白在SAMP8小鼠穹隆下器的表达及意义[J];解剖学报;2014年02期

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本文编号：394755