过氧化氢诱导人巨核细胞系Dami氧化应激模型的建立及评价

发布时间：2017-06-14 11:15

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【摘要】：目的探讨过氧化氢(H2O2)诱导Dami细胞氧化应激模型的条件,建立并评价模型。方法不同浓度过氧化氢处理Dami细胞后,Giemsa染色,显微镜观察细胞形态学的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,绘制生长曲线,计算半数抑制浓度(IC50);加载DCFH-DA探针后流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基水平;Western blot检测核因子NF-E2相关因子(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)表达量。结果随着H2O2浓度升高,Dami细胞核皱缩趋于明显,存活率下降,IC50为(0.9132±0.144)mmol/L;0.1 mmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L H2O2处理Dami细胞2 h,细胞氧化应激阳性率分别为12.11%、20.91%、52.53%;H2O2处理Dami细胞24 h后,抗氧化蛋白Nrf2、GCLC水平升高,未检测到HO-1和NQO1的表达。结论 1 mmol/L H2O2是建立Dami细胞氧化应激模型的合适浓度。Dami细胞抗氧化应激反应与Nrf2/ARE通路有关。
【作者单位】： 解放军总医院南楼血液科;解放军总医院生物治疗病区;解放军总医院老年心内科;
【关键词】： 过氧化氢 Dami细胞 氧化应激模型 NF-E相关因子
【基金】：科技部“新药创制”重大专项(2008ZXJ09001-019) 全军保健专项课题(13BJ247)~~
【分类号】：R363
【正文快照】： 氧化应激最早由Sohal等[1]在1985年提出,指机体氧化和抗氧化系统失衡,产生过多的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)或活性氮自由基(reactive nitrogen species,RNS),造成组织损伤或疾病发生[2]。近几年研究发现氧化应激和免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia

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