胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡

发布时间：2017-06-15 15:11

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【摘要】：目的:观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法:培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。CCK-8法检测细胞生存率,单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率变化,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达。结果:(1)与对照组相比,不同浓度(3、6、9、12、15 mmol/L)的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低,且呈剂量依赖性;不同作用时间(1、2、3、6 h)ATP(6 mmol/L)也可使SHSY5Y细胞存活率明显降低,3 h达高峰,呈时间依赖性。(2)ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多(P0.05),随时间延长,6 h时降到对照水平;ATP作用1 h时,LC3-Ⅱ表达显著增强(P0.05),形成高峰,与自噬空泡增多的时点重合,2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱,6 h时降到对照水平。(3)与对照组相比,ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰(P0.05),6 h时仍然保持在3 h的水平;cleaved caspase-3表达量同步增强(P0.05),6 h时达高峰。结论:胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡;自噬增强在前,凋亡高潮在后;随着ATP作用时间的延长,凋亡占主导地位。
【作者单位】： 新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学教研室;
【关键词】： 腺苷三磷酸 SH-SYY细胞 自噬 细胞凋亡
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81271376;No.81371346;No.81100912)
【分类号】：R363.21
【正文快照】： 腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)不仅是体内储能供能物质,还是细胞间传递信息的重要活性分子,中枢神经系统(central nervous system,CNS)神经细胞释放的ATP作为递质,对神经功能的作用越来越受到关注[1]。生理条件下胞外ATP浓度在μmol/L水平,它通过核苷转运形式释放至

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本文编号：452780