pEGFP-C2-NLRC5重组质粒的构建及其表达

发布时间：2017-06-16 06:08

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【摘要】：目的构建含NLRC5蛋白功能区的cDNA序列的真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5,并检测其在肾成纤维细胞(COS-7)中的表达。方法采用RT-PCR法从人肝星状细胞(LX-2)中获得NLRC5蛋白功能区的cDNA序列片段,用EcoRⅠ和BamHⅠ双切酶将片段和载体pEGFP-C2双酶切后,酶切产物加入T4连接酶16℃连接过夜,构建真核表达载体pEGFP-C2-NLRC5。将构建成功的pEGFP-C2-NLRC5重组质粒经PCR,限制性内切酶酶切和测序鉴定后用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将其转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法鉴定融合蛋白表达。结果阳性克隆经双酶切法鉴定可见NLRC5基因片段。转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,而且主要分布在细胞质中,Western blot法也可检测到在74 ku处有一明显条带,其大小符合EGFP-NLRC5表达的蛋白(NLRC5蛋白大小约为47 ku,EGFP蛋白大小约为27 ku),表明融合蛋白可在哺乳动物细胞中成功表达。结论成功构建pEGFP-C2-NLRC5质粒,NLRC5蛋白可在COS-7细胞中成功表达。
【作者单位】： 安徽医科大学药学院;
【关键词】： NLRC COS- 基因表达 重组质粒 转染
【基金】：国家自然科学基金(编号:81273526) 安徽省自然科学基金(编号:KJ2010A178)
【分类号】：R346
【正文快照】： 天然免疫系统中的核苷酸结合寡聚结构域样受体NOD样受体(NOD-like receptor,NLR)家族成员之一——NLR家族含CARD结构域5(NOD-like re-ceptor family CARD domain containing 5,NLRC5)蛋白分子,参与了对先天免疫核因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)信号通路中一种非常重

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

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【共引文献】

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5 李丽s

本文编号：454604