日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立

发布时间：2017-06-18 09:15

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【摘要】：日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是单股正链RNA病毒,全基因组仅含有一个开放阅读框,编码一条多聚蛋白前体,病毒编码的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工过程中起着重要作用,是重要的药物靶标。通过PCR扩增了NS2BH-NS3蛋白酶的编码区,构建了原核表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到可溶性的NS3蛋白酶,用镍亲和层析方法进行了纯化。建立了基于荧光共振能量转移的NS3蛋白酶活性检测方法,并确定了最佳的反应条件,对113个化合物进行了筛选,发现其中两个化合物对JEV NS3蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究为JEV NS3蛋白酶的活性研究及抑制剂筛选提供了一种操作方便、成本低廉的方法。
【作者单位】： 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室;华中农业大学动物医学院;
【关键词】： 日本脑炎病毒 NS蛋白酶 可溶性表达 酶活性 抑制剂高通量筛选
【基金】：国家自然科学基金(No.30800831) 国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2011AA10A212)资助~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是由蚊虫媒介传播的嗜神经病毒,为黄病毒科黄病毒属成员之一。JEV主要在亚洲流行并造成较大的危害[1-2],其感染猪后导致母猪流产,产死胎、木乃伊胎等繁殖障碍,公猪多发生睾丸炎,给我国的养猪业造成了巨大经济损失[3]。同时JEV可

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本文编号：458731