microRNA原位杂交技术影响因素的探讨

发布时间：2017-06-18 23:00

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【摘要】：目的探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法。方法选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U6探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-231爬片细胞进行U6探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR-375的表达分析。结果不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的U6表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20μg/ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200μg/ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2μg/ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为1ng/ml和100ng/ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT-549的miR-375表达明显低于T47D。结论 miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助。
【作者单位】： 南昌大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;南昌大学附属感染病医院病理科;南昌大学第二临床医学院;
【关键词】： microRNA 原位杂交技术 影响因素
【基金】：国家自然科学基金项目资助(30860319;81160248;81360313) 江西省自然科学青年基金资助(20142BAB215051) 江西省研究生创新专项资金资助(YC2013-S006)
【分类号】：R361
【正文快照】： Discussion on influence factors of microRNA in situ hybridizationLiu Zhuoqi 1,Yang Xiaohong1,Xiao Yingqun2,Huang Bo2,Zhang Ping2,Yang Xianhe2,Huang Yun3,Wang Weidong3,Wang Mengmeng1,Luo Daya1*(1 School of Basic Medical Sciences,Nanchang University,Nancha

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