HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表达分析

发布时间：2017-06-21 11:10

  本文关键词：HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表达分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus, HSV)是一种危害人类健康的常见病原体,分为HSV-1和HSV-2两种血清型。病毒通过受损皮肤或黏膜感染宿主细胞,在宿主的上皮组织内生长增殖,另一方面,病毒也能进一步从感染的上皮组织的神经末梢入侵到神经元,在初次感染后于三叉神经节、背根神经节等处建立潜伏性感染,并伴随宿主终生。其中,单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus Ⅰ, HSV-1)可引起人皮肤、黏膜和神经系统感染,能导致角膜炎、疱疹性脑炎、唇疱疹和龈口炎等疾病。衣被蛋白(也称间层蛋白,tegument protein)在成熟的疱疹病毒颗粒中既以结构蛋白的形式存在,又在病毒的增殖过程中发挥着特定的生物学作用。UL7是HSV-1型疱疹病毒衣被蛋白的编码基因之一,目前国内外对其编码的蛋白进行的研究还不够深入,文献中都报道较少。但是有研究证实,UL7编码基因在疱疹病毒间是高度保守的,作为HSV-1 UL7基因的同源基因,牛疱疹病毒1型(Bovine herpes virus 1, BHV-1)和伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)的UL7突变株在细胞中的复制能力受损,只是对其具体机制还不是很了解。同时也有实验表明,HSV-1型疱疹病毒的UL7与UL51通过相互作用,参与病毒感染细胞的过程。基于对UL7蛋白的初步了解,为了更加系统地研究UL7蛋白在HSV-1型疱疹病毒增殖过程中的功能意义,本课题做了以下工作：提取了HSV-1的基因组,并用PCR方法扩增了UL7基因片段,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得并纯化GST-UL7重组蛋白,将其作为抗原免疫ICR小鼠制备抗UL7多克隆抗体。用间接法ELISA检测抗体的效价,Western Blot检测抗体的特异性,并使用该多克隆抗体对HSV-1病毒感染Vero细胞后的各时间点UL7蛋白表达量进行检测。实验结果表明,GST-UL7重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,间接法ELISA检测抗UL7抗体效价可达1：163840以上。Western Blot实验证明抗UL7多克隆抗体可以特异性识别UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero细胞后的各时间点均检测到UL7蛋白的表达。通过成功获得GST-UL7融合蛋白,并制备了抗UL7蛋白的多克隆抗体,利用该抗体我们初步确定了UL7蛋白在HSV-1增殖过程中呈持续性表达。
【关键词】：单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1) UL7 衣被蛋白 原核表达 多克隆抗体
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-15
• 1 疱疹病毒的基本生物学特征7-8
• 2 HSV-1的感染与临床症状8-11
• 3 HSV-1的治疗11
• 4 HSV-1病毒的基因结构及其生物学性状11-12
• 5 HSV-1的衣被蛋白12-15
• 实验材料与方法15-37
• 1 实验材料15-18
• 2 实验方法18-37
• 实验结果与分析37-43
• 1 HSV-18F株的基本特性37
• 2 重组质粒的构建37-38
• 3 UL7蛋白在原核细胞中的表达与纯化38-41
• 4 抗UL7蛋白多克隆抗体的制备及特异性鉴定41
• 5 核质分离效果的鉴定41-42
• 6 抗UL7蛋白抗体应用于HSV-1病毒中UL7蛋白的检测42-43
• 讨论43-46
• 小结46-47
• 参考文献47-51
• 附录51-61
• 附录1 主要缩略词表51-52
• 附录2 论文所用序列52-53
• 附录3 主要溶液配制表53-57
• 附录4 测序峰形图57-59
• 附录5 蛋白质谱鉴定结果59-61
• 致谢61-62
• 研究生简历62-63

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