S100A9蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

发布时间：2017-06-27 18:02

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【摘要】：目的制备S100A9重组蛋白及其单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特异性鉴定。方法以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-S100A9和pET-32a-S100A9。融合蛋白在大肠杆菌中表达,纯化后以His-S100A9作为免疫原制备鼠mAb。采用ELISA和Western blot法鉴定筛选抗体。挑取杂交瘤细胞株制备腹水并纯化,采用Western blot法和间接免疫荧光染色鉴定mAb的特异性。结果 GST-S100A9和His-S100A9融合蛋白均成功构建表达。共筛选到抗S100A9杂交瘤细胞18株,其中15株在Western blot检测中与重组蛋白呈强阳性反应,3株呈弱阳性反应。2株可识别肝癌组织间隙液中的S100A9天然蛋白。结论成功地制备出多株抗S100A9的mAb。
【作者单位】： 蛋白质组学国家重点实验室 北京蛋白质组研究中心抗体工程研究室;
【关键词】： SA 单克隆抗体 杂交瘤 细胞融合
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973)(2011CB915502) 国家高技术研究发展计划(863)(2012AA020201) 蛋白质组学国家重点实验室(SKLP Y200907)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： S100蛋白家族是一个由20多个相对分子质量(Mr)9 000～13 000蛋白组成的钙结合蛋白家族[1]。S100A9又称钙粒蛋白B(calgranulin B)或迁移抑制因子相关蛋白14(migration inhibitory factor-relatedprotein 14,MRP14)是S100蛋白家族中的一员,在体内循环的粒细胞和单核细胞中高表达

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本文编号：490685