人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定
发布时间：2017-06-29 16:01
本文关键词：人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础。方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMPmyc/His片段,插入pMH3表达载体。利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株。以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性。结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株。镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95%以上且具有生物学活性。结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具。
【作者单位】： 北京大学基础医学院免疫学系;北京大学人类疾病基因研究中心 卫生部医学免疫学重点实验室;
【关键词】： PC-分泌微量蛋白 人 CHO细胞 遗传 重组 基因表达 分离和提纯
【基金】：国家教育部博士点基金(20120001110001) 国家“重大新药创制”科技重大专项(2011ZX09506-005) 国家自然科学基金(31270915)资助~~
【分类号】：R392.12
【正文快照】： 趋化因子是一类具有趋化活性、相对分子质量在8×103~10×103的分泌性细胞因子。至今发现约50种人的趋化因子,属细胞因子中的最大家族[1-3]。趋化因子超家族成员具有一定的同源结构,根据一级结构中保守的2~8个Cys的前2个Cys的排列方式,可将趋化因子超家族分为CXC(α)、CC(β)
【共引文献】
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3 王智权;李轶女;张志芳;易咏竹;吴润;;用杆状病毒表达载体在家蚕中表达犬γ干扰素及产物的抗病毒活性[J];蚕业科学;2014年03期
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7 沈e，
本文编号：498422
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