单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制

发布时间：2017-07-02 16:12

  本文关键词：单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的以单增李斯特菌(LM)内化素A蛋白(InlA)单克隆抗体为基础,研制其胶体金免疫层析检测试纸条。方法采用DNAStar软件对LM inlA全长基因编码蛋白进行抗原表位分析,截取部分inlA基因片段构建原核表达质粒,诱导表达和纯化获得重组蛋白。以该蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性、稳定性进行评价。结果筛选到2株高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体属于IgG1亚类,小鼠腹水抗体效价为1∶64 000;研制的试纸条可与LM发生阳性反应,而与非LM李斯特菌、链球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O157∶H7等食源性致病菌均不发生阳性反应;LM纯培养物敏感性为2.4×105cfu/ml,模拟猪肉样品敏感性为4.0×106cfu/ml;4℃保存期可达16周以上。结论研制的胶体金免疫层析试纸条具有快速、特异、敏感等优点,可以用于样品中LM的快速检测。
【作者单位】： 华中农业大学动物医学院农业部兽用诊断制剂创制重点实验室;
【关键词】： 单增李斯特菌 InlA蛋白 单克隆抗体 胶体金免疫层析检测试纸条 食源性致病菌
【基金】：“十二五”农村领域国家科技计划课题(2012AA101601) 武汉市科技攻关计划(2013020501010172)
【分类号】：R392
【正文快照】： 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种重要的人兽共患病原菌,在自然环境中分布广泛,易造成食物污染,可引起人的败血症、脑膜炎、胃肠炎、肺炎等,病死率高,免疫力低下者(如65岁以上的老人、孕妇及新生儿)更易感染[1-2]。世界卫生组织(WHO)将其列为需要重点监

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 谢士嘉;王静;王振国;;利用胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法的建立[J];中国国境卫生检疫杂志;2010年02期

2 熊国华;于莉;曹际娟;曹远银;王静;;单增李斯特菌免疫胶体金试纸条快速检测[J];中国公共卫生;2008年02期

3 崔焕忠;张辉;王兴龙;;单增李斯特菌单克隆抗体的制备及胶体金试纸的研制[J];中国兽医科学;2010年01期

4 彭珍;魏华;万翠香;熊勇华;赖卫华;徐锋;;单核增生李斯特菌Internalin A的克隆表达与抗体制备[J];中国微生态学杂志;2009年12期

5 喻翠翠;孟宪荣;栗绍文;梅仕林;张望;周蕾蕾;陈辉;毕丁仁;;猪结合珠蛋白基因的克隆、原核表达及单克隆抗体制备[J];中国兽医学报;2010年09期

6 罗雁非;贾芙蓉;丁旭;方玲;郑岚;何成彦;;胶体金标记单克隆抗体测定单增李斯特菌试剂盒制备[J];中国实验诊断学;2009年09期

7 罗立新;缪珑;潘力;岳振峰;谢丽琪;;快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究[J];中国卫生检验杂志;2006年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王燕;窦恒利;胡成进;;铜绿假单胞菌胶体金免疫层析法的研制和应用[J];标记免疫分析与临床;2010年03期

2 谢士嘉;王静;王振国;;利用胶体金免疫层析技术快速定量检测单增李斯特菌方法的建立[J];中国国境卫生检疫杂志;2010年02期

3 杨素;陈博文;沙才华;廖秀云;秦爱建;王继华;彭运平;刘晓云;;赤羽病胶体金免疫层析试纸条的研制[J];中国畜牧兽医;2009年03期

4 付瑞燕;周阳;祝长青;;食品中单增李斯特菌检测技术研究进展[J];安徽农业大学学报;2012年06期

5 KONG Fan-de;LIU Yang;XU Shu-fei;PENG Xiao-li;WU De-feng;LIN Li;;Preliminary Study on Immuno-gold Chromatography Assay for Rapid Detection of Vibrio parahaemolyticus[J];Animal Husbandry and Feed Science;2012年05期

6 陈燕;刘杰;李玉兰;刘芳生;;食源性致病菌快速检测技术研究进展[J];安徽农业科学;2013年05期

7 谢雪钦;;食品微生物快速检测方法优劣比较[J];质量技术监督研究;2013年03期

8 吴雁军;曹亢;郭慧媛;张昊;任发政;;单增李斯特菌检测方法的最新研究进展[J];中国乳业;2011年04期

9 王辉;张伟;王燕;顾希;;食品病原微生物快速检测技术及研究进展[J];粮食与油脂;2012年04期

10 林婷婷;阎俊;卢瑛;潘迎捷;;层析体系对磁性试纸条检测准确性的影响[J];江苏农业科学;2012年11期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 庄金秋;梅建国;沈志强;;胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 杨永倩;HP-PRRSV HuN4株感染仔猪发病过程中蛋白质分子演化网络的系统生物学研究[D];西北农林科技大学;2012年

2 孟赫诚;广州市熟肉制品微生物污染状况及其耐药性传播研究[D];华南理工大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 于丰宇;食品中单核细胞增生李斯特氏菌的毒力研究[D];西南大学;2011年

2 徐金亭;免疫磁珠的制备及其富集、分离单增李斯特菌的研究[D];暨南大学;2011年

3 段霞;单核细胞增生李斯特氏菌胶体金免疫层析方法的建立[D];南昌大学;2011年

4 黄岭芳;快速检测大肠杆菌O157:H7胶体金免疫层析方法的建立[D];南昌大学;2011年

5 崔佳;产Serpin双歧杆菌菌株筛选与serpin缺失株的构建[D];南昌大学;2011年

6 李波;空肠弯曲菌peblA和cadF的克隆表达及多克隆抗体制备与纯化[D];南昌大学;2011年

7 何勇琴;单核细胞增生性李斯特菌特异性抗体的制备研究[D];上海海洋大学;2011年

8 熊国华;单增李斯特菌及溶血素O与葡萄球菌三种肠毒素免疫胶体金检测技术研究[D];沈阳农业大学;2007年

9 刘丽强;19-去甲睾酮胶体金免疫层析试纸条的研制[D];江南大学;2007年

10 朱堂明;淡水水产品中单增李斯特菌双重PCR检测及基因分型[D];华中农业大学;2008年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王来城,王金星,赵小凡,蔡莹;家蝇防御素在大肠杆菌中的表达、纯化与抗体制备[J];动物学报;2005年02期

2 李干红,丁晓雯;李斯特菌及其快速检测[J];广州食品工业科技;2002年03期

3 彭剑淳,刘晓达,丁晓萍,付占江,王全立;可见光光谱法评价胶体金粒径及分布[J];军事医学科学院院刊;2000年03期

4 杨永杰,陈松华,葛锡锐;具有天然N端的小鼠高活性IL-18的高效表达与纯化[J];现代免疫学;2005年06期

5 姜迪来;凌宗帅;王克刚;张志梅;孙芙蓉;王洪海;项海波;曾萍;;SPA-ELISA用于单核细胞增生性李斯特菌检验的应用研究[J];食品科技;2006年09期

6 刘秀峰,陈平,吴护华;单核细胞增多性李斯特菌病研究近况[J];实用预防医学;2001年01期

7 杨书豪,张云汉,王玉金,杨艳艳,王玉珠,田素娟,张燕;血清甲胎蛋白胶体金免疫层析快速检测法的建立及应用[J];实用肿瘤杂志;2004年01期

8 李永勤;以膜为固相载体的免疫胶体金快速试验[J];微生物学免疫学进展;2003年01期

9 王刚,邱阳;单核细胞增生性李斯特菌及其快速检测[J];微生物学杂志;2001年01期

10 王静;陈维娜;胡孔新;李伟;闫中强;周蕾;姚李四;牛春莉;;大肠杆菌O157胶体金免疫层析快速筛查方法的建立[J];卫生研究;2006年04期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 崔焕忠;张辉;王兴龙;;胶体金试纸快速检测食品中单增李斯特菌[J];食品科学;2010年04期

2 ;美国学者成功研制出能够与除4c型单增李斯特菌外的血清型全部反应的混合单克隆抗体[J];中国乳业;2011年04期

3 郭桂萍;葛红梅;王匀;张文国;倪鹏;;单增李斯特菌检测技术研究进展[J];中国食物与营养;2011年03期

4 吴雁军;曹亢;郭慧媛;张昊;任发政;;单增李斯特菌检测方法的最新研究进展[J];中国乳业;2011年04期

5 丁建英;韩剑众;;食品中单增李斯特菌的存在现状及检测方法研究进展[J];食品研究与开发;2008年12期

6 林婷婷;杨晶;李志清;王彩霞;向军俭;;单增李斯特菌溶血素(LLO)的原核表达及其生物学活性鉴定[J];微生物学通报;2011年06期

7 蒋亚男;满朝新;赵凤;刘颖;薛玉清;胡惠秩;李博;姜毓君;;环介导恒温扩增方法快速检测乳中单增李斯特菌[J];中国乳品工业;2011年04期

8 赵贵明,何艳玲,边凌淳,刘沛;李斯特氏菌选择性培养基改良实验[J];中国公共卫生;2004年08期

9 孙f^,吴建中,张宁,欧仕益,唐书泽;荧光实时定量PCR检测单核李斯特菌方法学建立及应用[J];实用预防医学;2005年03期

10 朱振华;王双桂;;基于特异性噬菌体引物PCR检测水产品中单增李斯特菌方法的初步研究[J];检验检疫科学;2007年S1期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年

2 李安民;;单克隆抗体标载的~(131)I治疗恶性脑胶质瘤Ⅱ期临床试验的三种给药途径的研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

3 于翠;施曼铃;王桂珍;吴建祥;周雪平;;几种重要植物病毒单克隆抗体的制备和快速检测方法的建立[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年

4 刘振勇;邓国华;李呈军;张立春;田国彬;何后军;于康震;陈化兰;;抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年

5 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年

6 张改连;黄烽;;抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体rituximab治疗类风湿关节炎的临床研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年

7 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

8 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年

9 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年

10 杨天兵;沈倍奋;;抗人重组白细胞介素1(rHIL-1)单克隆抗体的研制[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 贾超时邋李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年

2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年

3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年

4 本报特约撰稿人 李朝;单抗：生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年

5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年

6 记者 杨俊坚;单抗药物：站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年

7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年

8 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年

9 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年

10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年

2 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年

3 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年

4 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年

5 秦迎松;人促血液血管细胞生成素（Haemangiopoietin, HAPO）单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年

6 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年

7 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

8 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年

9 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

10 王晓洁;对虾白斑症病毒快速检测试剂盒的研制及其应用[D];中国海洋大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 黄子逸;LIGHT基因转染细胞株和单克隆抗体的研制及其对T细胞的共刺激效应[D];苏州大学;2010年

2 李铁民;抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究[D];中国医科大学;2003年

3 李晓龙;肝癌相关抗原SMP30 mRNA在癌细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2010年

4 郑杰;分泌抗猪流感病毒（河南株）单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、鉴定和初步应用[D];河南农业大学;2004年

5 邵炜慧;盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制及初步应用[D];扬州大学;2005年

6 杨宁;纳豆激酶的纯化及其单克隆抗体的制备鉴定[D];山西农业大学;2005年

7 唐琦;抗麻痹性贝毒素GTX2，3单克隆抗体的制备及特性分析[D];暨南大学;2005年

8 贾娟娟;抗胰岛素单克隆抗体的研制及酶联免疫分析方法的建立[D];中国原子能科学研究院;2005年

9 李彬;TLR4单克隆抗体诱导同种心脏移植免疫耐受的研究[D];苏州大学;2010年

10 王雨晨;伏马毒素B_1单克隆抗体的制备及多种免疫学检测方法的建立[D];上海交通大学;2011年

  本文关键词：单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：510592