结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定

发布时间：2017-07-04 12:26

  本文关键词：结核分枝杆菌Zmp1基因原核表达载体的构建及表达鉴定

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【摘要】：目的构建结核分枝杆菌锌离子依赖的金属蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,采用PCR法扩增Zmp1基因;定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点中,构建重组原核表达质粒pET-32a(+)-Zmp1;转化入大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot法鉴定。结果PCR法扩增出Zmp1基因;重组表达质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确;表达的重组Zmp1融合蛋白相对分子质量(Mr)约为94 000,大小与预期融合蛋白一致;重组Zmp1融合蛋白可与His标签单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了Zmp1基因原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得重组Zmp1融合蛋白表达。
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室;重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;
【关键词】： 结核分枝杆菌 Zmp 原核表达
【基金】：重庆市自然科学基金(cstc2012jjA10023) 国家自然科学基金(30771922,30901280)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的结核病(tuberculosis,TB)是严重危害人类健康的慢性传染病,全球有近1/3人口感染了结核菌,每年新发结核病例约870万例,每年死于结核病的人数高达200万[1]。结核病至今仍未取得有效控制,除与卡介苗(Bacillus Calmette-

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本文编号：517806