小鼠微小RNA miR-21真核表达载体构建及其在293细胞的活性表达

发布时间：2017-07-27 14:19

  本文关键词：小鼠微小RNA miR-21真核表达载体构建及其在293细胞的活性表达

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【摘要】：目的构建小鼠微小RNA miR-21的真核表达载体,在人胚肾293细胞中验证其活性表达,为进一步以此载体研究miR-21的功能打下基础。方法根据小鼠miR-21的成熟序列及其上下游约170 bp的序列设计引物,利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增含有miR-21前体的片段382 bp,克隆到质粒pRc/CMV,对重组质粒经双酶切及测序分析,鉴定完全正确后转染人胚肾293细胞,G418(1 000 mg/L)筛选后获得miR-21稳定表达细胞系,Northern blot验证其在293细胞的过表达;同时构建pmiR-21-Luc reporter荧光素酶报告质粒,与miR-21重组质粒共转染293细胞进行荧光素酶活性分析,验证其调控活性。结果成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,其可以在293细胞中稳定高效表达,荧光素酶活性实验证实其有生物活性。结论成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了实验基础。
【作者单位】： 第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 重庆市纳米医药工程技术研究中心;
【关键词】： miRNAs miR- 真核表达载体 细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30901558) 烧伤、创伤与复合伤国家重点实验室自主课题(SKLZZ201122)
【分类号】：R393
【正文快照】： 微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一类由基因组编码的长度约20 nt的高度保守的内源性微小的非编码单链RNA分子,通过与对应的靶mRNA的3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)的非完全或完全配对结合,从而阻止其翻译或破坏其稳定性,实现对基因表达的调控[1]。越来越多的研究

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