CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定

发布时间：2017-08-13 12:25

  本文关键词：CAT为报告基因的铜绿假单胞菌启动子文库的建立及初步鉴定

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【摘要】：以CAT(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)为报告基因,构建p CAT2启动子探针载体从绿脓杆菌基因文库中筛选启动子。Sau3AⅠ酶切铜绿假单胞菌的基因组,回收(500~1 500 bp)片段并与p CAT2载体连接构建铜绿假单胞菌的基因组文库,PCR鉴定文库的多样性,利用氯霉素(10μg/m L)和卡那霉素(50μg/m L)双抗平板筛选了16株阳性菌株,并用PCR、测序、NCBI比对进行鉴定。构建的基因文库的库容量可达50 000个,覆盖基因全长的3.5倍,插入率达90%,具有较强的随机性。采用双抗平板进行启动子的筛选,筛选效率高达96%。获得了绿脓杆菌基因组中的9个启动子,同源性达99%以上,并对其活性进行初步鉴定,为铜绿假单胞菌基因表达调控的进一步研究奠定基础。
【作者单位】： 昆明理工大学医学院;成都军区昆明总医院核医学科;
【关键词】： 氯霉素乙酰转移酶(CAT) 报告基因 铜绿假单胞菌(PA) 启动子文库
【基金】：国家自然科学基金项目(31160193) 云南省教育厅科学研究基金项目(2010Y398) 云南省应用基础研究面上项目(2010ZC055;2012FB135)
【分类号】：R3416;R378.991
【正文快照】： 氯霉素乙酰转移酶(Chloramphenicol acetyl-transferase,CAT)是一种原核酶类,含有CAT的细菌暴露在氯霉素中可以使其乙酰化而失去活性,这是某些细菌抗氯霉素的主要原因,该酶能在大肠杆菌中表达,且非常稳定[1],是常用的报告基因之一。铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)又

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