加味龟鹿二仙汤对原发性卵巢功能不全模型小鼠的干预作用及其机制研究

发布时间：2017-08-14 02:02

  本文关键词：加味龟鹿二仙汤对原发性卵巢功能不全模型小鼠的干预作用及其机制研究

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【摘要】：目的:采用环境化学物质4-乙烯基环己烯双环氧化物(4-vinylcyclohexene diepoxide,VCD)构建原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)小鼠模型,观察加味龟鹿二仙汤对POI模型小鼠动情周期、血清抗苗勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、卵巢组织形态学及mi R-190表达的影响,探讨加味龟鹿二仙汤对POI的干预作用及机制,为临床上中药治疗POI提供理论依据。方法:将连续两个动情周期正常的40只昆明雌性小鼠纳入实验,随机分为空白组、模型组、DHEA组、中药组。对模型组、DHEA组、中药组连续15天腹腔注射环境化学物质VCD构建POI模型。其后中药组给予加味龟鹿二仙汤中药药液0.3ml灌胃,DHEA组给予DHEA药液0.3ml灌胃,而空白组和模型组均给予生理盐水0.3ml灌胃。4天为一疗程,每4天停1天,共30天。灌胃处理完成后采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组小鼠血清AMH水平,并光镜下观察各组小鼠动情周期和卵巢组织形态学变化;应用实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)技术检测各组小鼠卵巢组织中mi R-190表达水平。结果:1.小鼠动情周期改变:空白组小鼠阴道脱落细胞涂片均有规律的动情周期;其余三组经腹腔注射VCD后均有动情周期紊乱,且以动情间期为主。DHEA组和中药组经药物干预治疗后,小鼠紊乱的动情周期稍有改善,表现为动情周期延长,动情间期延长。2.小鼠卵巢组织形态学改变:模型组小鼠镜下见卵巢明显萎缩,皮质增厚,可见较多闭锁卵泡,原始卵泡及各级发育中的卵泡消失或偶见。DHEA组和中药组镜下见小鼠卵巢原始卵泡及初级卵泡稍增多,闭锁卵泡减少。3.模型组小鼠血清AMH含量低于空白组,但差异并不显著;与模型组相比,DHEA组和中药组小鼠血清AMH含量均有上升趋势,但差异并不明显。4.模型组小鼠卵巢mi R-190表达明显高于空白组,差异有显著统计学意义(P0.01);与模型组相比,DHEA组和中药组小鼠卵巢mi R-190表达量均降低,差异有统计学意义(P0.01);中药组小鼠卵巢mi R-190表达低于DHEA组,差异有统计学意义(P0.01),与空白组相比,中药组小鼠卵巢mi R-190表达量稍升高,差异无统计学意义(P0.05)。结论:1.运用环境化学物质VCD可以成功建立POI模型小鼠。2.加味龟鹿二仙汤能有效增加POI模型小鼠卵巢组织原始卵泡和初级卵泡数量,其机制可能与抑制卵巢mi R-190表达有关。
【关键词】：加味龟鹿二仙汤 原发性卵巢功能不全 小鼠 抗苗勒氏管激素 微小核糖核酸-190基因 脱氢表雄酮
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料与方法12-22
• 2.1 实验材料12-14
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 实验用药与配制12
• 2.1.3 主要实验试剂12-13
• 2.1.4 主要仪器13
• 2.1.5 主要试剂的配制13-14
• 2.2 实验方法14-22
• 2.2.1 实验分组14
• 2.2.2 POI小鼠模型的建立14-15
• 2.2.3 给药剂量和方法15
• 2.2.4 标本采集15-16
• 2.2.5 实验步骤16-20
• 2.2.6 统计方法分析20-22
• 第3章 结果22-28
• 3.1 一般情况22
• 3.2 各组小鼠阴道脱落细胞检测结果22-23
• 3.3 各组小鼠卵巢组织形态学变化23-25
• 3.4 各组小鼠血清中AMH含量的检测结果25-27
• 3.5 实时荧光定量PCR检测小鼠卵巢mi R-190 表达27-28
• 第4章 讨论28-33
• 4.1 POI小鼠模型的建立28-29
• 4.2 AMH与POI29-30
• 4.3 miR-190 的表达在POI发病中的机制30-31
• 4.4 加味龟鹿二仙汤治疗POI的作用机理31-33
• 第5章 结论与展望33-34
• 5.1 结论33
• 5.2 展望33-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-39
• 攻读学位期间的研究成果39-40
• 综述40-46
• 参考文献44-46

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本文编号：670135