鸡源与人源大肠杆菌主要耐药基因检测及其传递规律分析

发布时间：2017-09-01 20:13

  本文关键词：鸡源与人源大肠杆菌主要耐药基因检测及其传递规律分析

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【摘要】：近年来,随着辽宁省畜禽养殖规模迅速发展,大量抗菌药物广泛用于预防畜禽疾病,导致大肠杆菌耐药性的产生和传播越来越严重。为明确大肠杆菌耐药性产生的原因和发展趋势,建立预防耐药性产生和消除的方法,解决细菌产生耐药性对我国动物疾病防治和公共卫生安全带来的危害,开展了鸡源与人源大肠杆菌主要耐药基因的检测及同源性分析,并对其耐药基因的传递规律进一步分析验证,为指导临床合理用药及对人和动物大肠杆菌病的防控提供科学依据。1.鸡源大肠杆菌耐药性跟踪检测对2012~2015年从辽宁省某规模化肉鸡养殖场分离获得的218株鸡源大肠杆菌,采用微量稀释法进行了14种兽用和16种人用抗菌药的药物敏感性测定,并参照CLSI制定的肠杆菌判定标准进行判定。结果显示,鸡源大肠杆菌对兽用药氨苄西林、恩诺沙星、复方新诺明、磺胺异VA唑、四环素和人用药哌拉西林、替卡西林、环丙沙星都产生显著耐药性,平均耐药率达60%以上,而且其耐药性总体上均呈现逐年上升的趋势。对4年间所分离的鸡源大肠杆菌耐药性检测结果与EUCAST发布的野生型菌株最小抑菌浓度(MIC)值分布进行比较分析,耐药范围基本一致,但对大观霉素、氨苄西林、恩诺沙星、复方新诺明等药物的MIC值发生了明显右移,表明该肉鸡场大肠杆菌对上述抗菌药的耐药强度呈现逐渐增强的趋势。耐药率较高并逐年显著增强的药物品种,如四环素、氟苯尼考等均是鸡场长期使用的药物,说明细菌耐药性的产生与长期使用密切相关。2.鸡源与人源大肠杆菌耐药基因检测及同源性分析对分离获得的鸡源和人源大肠杆菌进行14种兽用和16种人用抗菌药的药物敏感性测定,结果显示,鸡源和人源大肠杆菌共同产生表观耐药的兽用抗菌药有10种,人用抗菌药有6种。对分离菌株选取共同耐药率较高的6类抗菌药物的10种主要相关基因进行检测,结果显示鸡源和人源大肠杆菌共同携带的耐药基因有7种,其中gyrA和gyrB的检出率均达到100%;对共同携带的耐药基因进行核苷酸同源性分析,结果显示gyrB、sul2、TEM的同源性较高,分别为100%、99.55%、99.38%,mcr-1、floR、gyrA同源性也达到90%以上,分别为98.23%、97.75%、93.33%。研究表明该肉鸡场鸡源和人源大肠杆菌共同对多种常用兽用和人用抗菌药产生表观耐药性,部分相关耐药基因具有高度同源性,表明细菌耐药性及其相关基因可能在肉鸡场鸡源和人源大肠杆菌中传播。3.不同来源大肠杆菌耐药菌株的同源性与耐药性比较分析对分离获得的鸡源和人源大肠杆菌,应用脉冲场凝胶电泳方法进行分子分型鉴定,比较不同来源耐药菌株的基因型,进行遗传相关性分析,以证明携带同种耐药基因的菌株是否在鸡和人以及不同个体之间传播,并与大肠杆菌表观耐药谱型进行比较分析。结果显示,同一肉鸡场内动物与饲养员及不同个体之间都存在PFGE图谱完全相同的菌株。说明携带同种耐药基因的菌株可能在肉鸡和饲养员及不同个体中水平传播。对不同来源大肠杆菌的PFGE分型和药敏结果进行比较可知,相同PFGE分型的菌株其耐药谱型不一定相同,而不同PFGE分型的菌株其耐药谱型可能相同。提示一是耐药基因的复杂性和多样性,二是同一克隆型的菌株在增殖播散的过程中可能存在耐药质粒的获取或丢失导致耐药性改变,而不同克隆株之间可能通过耐药质粒水平传播耐药性。4.携带耐药基因大肠杆菌的转接试验为确证鸡源与人源大肠杆菌耐药性是否发生水平传播,对分离的耐药菌株进行质粒转化试验,以携带可转化成功质粒的菌株作供体菌,大肠埃希菌J53作受体菌进行质粒接合转移试验,判定阳性质粒是否发生交互传播,检测接合子耐药性、耐药基因及PFGE谱型。结果显示,接合子检出耐药基因mcr-1、floR、sul2。耐药性检测接合子对所对应的药物多粘菌素、氟苯尼考和磺胺异VA唑产生了耐药,说明耐药基因可通过质粒介导在大肠杆菌不同来源菌株之间水平传播,进而传播耐药性。研究证明鸡源大肠杆菌如果存在较高耐药性,就可能通过养殖环节向人源大肠杆菌传递。
【关键词】：鸡源大肠杆菌 人源大肠杆菌 耐药基因 同源性 传递规律
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61;R378.21
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-11
• 第一篇 文献综述11-20
• 第一章 大肠杆菌及其耐药性概述11-14
• 1.1 动物源性大肠杆菌概述11
• 1.2 大肠杆菌耐药性发展历史和研究现状11-12
• 1.3 大肠杆菌耐药基因研究现状12-14
• 第二章 大肠杆菌耐药性产生与互传机制研究14-20
• 2.1 大肠杆菌耐药性产生机制14-15
• 2.2 大肠杆菌对不同抗菌药物的耐药机制15-16
• 2.3 大肠杆菌耐药性传播机制16-20
• 第二篇 研究内容20-63
• 第一章 鸡源大肠杆菌耐药性跟踪检测20-29
• 1.1 材料与方法20-22
• 1.2 结果与分析22-27
• 1.3 讨论27-28
• 1.4 小结28-29
• 第二章 鸡源与人源大肠杆菌耐药基因检测及同源性分析29-47
• 2.1 材料与方法29-34
• 2.2 结果分析34-44
• 2.3 讨论44-45
• 2.4 小结45-47
• 第三章 不同来源大肠杆菌耐药菌株的同源性与耐药性比较分析47-53
• 3.1 材料与方法47-49
• 3.2 结果与分析49-51
• 3.3 讨论51-52
• 3.4 小结52-53
• 第四章 携带耐药基因大肠杆菌的转接试验53-63
• 4.1 材料与方法53-55
• 4.2 结果与分析55-61
• 4.3 讨论61-62
• 4.4 小结62-63
• 结论63-64
• 参考文献64-71
• 作者简介71-72
• 致谢72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：774173