二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

发布时间：2017-09-01 21:43

  本文关键词：二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

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【摘要】：目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。
【作者单位】： 暨南大学生命科学技术学院;暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室;
【关键词】： bFGF ds-Diabody 毕赤酵母 肺癌细胞
【基金】：中央高校基本科研业务费专项资金(21612112) 国家自然科学基金(81372281) 国家863项目(2009AA02Z112)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 血管生长因子可以通过刺激肿瘤血管新生来促进肿瘤细胞的生长、增殖及迁移等[1]。多种肿瘤组织高表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其受体[2-3]。近年临床研究发现,癌症患者长期

【参考文献】

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本文编号：774506