铜绿假单胞菌外毒素A基因突变体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

发布时间：2017-09-02 15:14

  本文关键词：铜绿假单胞菌外毒素A基因突变体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

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【摘要】：目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析。结果测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性。结论已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室;中国动物疫病预防控制中心;莱阳市畜牧兽医局;
【关键词】： 铜绿假单胞菌 外毒素 基因 突变体 原核细胞 基因表达
【基金】：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2009ZX10004-710)
【分类号】：R378.991
【正文快照】： 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeru-ginosa)是一种人畜共患的条件性致病菌,并在自然界中广泛存在,具有多种血清型,可产生多种致病因子。铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosaexotoxin A,PEA)是由铜绿假单胞菌分泌的细胞毒性外毒素,成熟的毒素分子是由638个氨

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本文编号：779301