人细小病毒B19 VP1u多克隆抗体的制备及其保守区外N端氨基酸对sPLA2活性影响的初步研究

发布时间：2017-09-09 17:50

  本文关键词：人细小病毒B19 VP1u多克隆抗体的制备及其保守区外N端氨基酸对sPLA2活性影响的初步研究

  更多相关文章： 人细小病毒B VPu 多克隆抗体 磷脂酶A

【摘要】：【目的】制备人细小病毒B19-VP1u的多克隆抗体,探究VP1u多克隆抗体及其保守区外N端氨基酸对病毒磷脂酶A2活性的影响。【方法】首先通过分子克隆方法构建相应原核表达载体;利用原核表达系统纯化含MBP标签的VP1u全长及N端系列截短突变融合蛋白;接着免疫新西兰大白兔制备全长VP1u蛋白的多克隆抗体;最后利用磷脂酶A2活性检测试剂盒检测了纯化蛋白的磷脂酶A2活性。【结果】Western blot及免疫荧光实验证实制备的多克隆抗体具有较高的特异性;磷脂酶A2活性检测发现全长VP1u-MBP融合蛋白具有一定的活性,该活性可以被VP1u的抗体抑制;N端保守区外截短系列蛋白的酶活检测发现,N端截掉12个氨基酸时酶活降低53%,截掉67个氨基酸时酶活性几乎完全丧失。【结论】首次发现VP1u保守区外N端氨基酸,尤其是第12个氨基酸前的区域以及第22-67个氨基酸之间的区域,对sPLA2活性的保持具有重要意义,推测该区域可能对维持正常的蛋白构象起重要的作用;而其特异性多克隆抗体的制备也为进一步研究B19病毒VP1u在病毒复制周期的作用奠定基础。
【作者单位】： 华中师范大学生命科学学院;武汉生物工程学院生物工程系;
【关键词】： 人细小病毒B VPu 多克隆抗体 磷脂酶A
【基金】：国家自然科学基金面上项目(No.30670081)
【分类号】：R392
【正文快照】： 人细小病毒B19(Human parvovirus B19,HPV-B19),属于红细胞病毒属(Erythrovirus),细小病毒亚科(Parvovirinae),它和2005年Allander发现的人博卡病毒(Human Bocavirus)是目前为止能够感染人类的仅有的两种已经确定的细小病毒科成员[1]。B19能感染儿童及成年人并引起一系列的疾

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 聂晓晶;张国成;樊蕊;孙新;成胜权;许东亮;付蓉;黄娜;杨晓蕾;;B19病毒VP1u蛋白对胎鼠心脏的影响[J];发育医学电子杂志;2013年01期

2 朱买勋;邵秋红;刘娟;邱洪;徐杨峰;;复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒作用机理研究[J];中国兽医杂志;2013年07期

3 李志敏;丁福先;何秉宁;袁鸿胜;施瑞华;;大理地区犬细小病毒VP2基因变异研究及进化分析[J];中国动物检疫;2013年10期

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 饶桂波;鹅细小病毒的分离鉴定及PCR-DHPLC检测方法的建立与初步应用[D];吉林农业大学;2013年

2 张月华;TLR7,9和人细小病毒B19在桥本甲状腺炎病变甲状腺组织中的相互关系[D];第四军医大学;2013年

3 王朝;猪转铁蛋白受体与PPV-VP2相互作用研究（一）蛋白表达、血清制备、酵母双杂交检测及受体逆转录病毒包装质粒的构建[D];中国农业科学院;2013年

4 张悦;利用DNA Shuffling技术进化靶向卵巢癌细胞的腺相关病毒[D];浙江理工大学;2013年

5 郝瑞;呼吸道感染住院儿童中HBoV1的流行情况及其基因突变与病毒载量关系研究[D];重庆医科大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 傅桂莲,盖晓东,刘华欣;分泌型磷脂酶A_2cDNA与载体pRc/CMV定向克隆及表达[J];中国现代医学杂志;1999年11期

2 张燕,薛耀明,郭爱林,张文敏;GST-IRS-4原核表达载体的构建、表达及抗GST-IRS4多克隆抗体的制备[J];实用医学杂志;2005年05期

3 吴镝,许国双,陈香美,师锁柱,洪权,张萍,吕扬;抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2005年06期

4 孙玉宁,靳更林,李燕,寿成超;人Norpeg蛋白的原核表达及其抗体的制备[J];宁夏医学院学报;2005年04期

5 黄柯;孟元光;韩为东;赵亚力;李琦;宋磊;;LRP16基因的多克隆抗体制备及表达的探索[J];军医进修学院学报;2007年02期

6 伍银桥;王孟薇;吴本俨;王刚石;尤纬缔;王卫华;;抗人胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体的制备、鉴定及初步应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年08期

7 杜洪桥;朱蓉;徐葛林;严家新;;两种亲和层析方法纯化兔抗CHO细胞蛋白多克隆抗体的比较[J];中国生物制品学杂志;2011年08期

8 安薇;徐霞;;人脂联素球状结构域基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J];中国免疫学杂志;2011年09期

9 胡文森 ,吴明杰;~(99m)Tc单克隆抗体的放射免疫显象:临床研究[J];国际放射医学核医学杂志;1986年01期

10 严鸣,孙世荣,周宝桐,徐世豪,盛志勇,马诺山;兔烧伤后血液中性粒细胞粘附及磷脂酶A2改变的研究[J];中国危重病急救医学;1996年10期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 杨敏;王锁英;许小朋;马洁;毛朝明;仝佳;邱谷风;胡正军;王胜军;邵启祥;许化溪;;人T-bet基因的表达、纯化及其多克隆抗体的制备[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

2 张敏;池霞;洪琴;童梅玲;郭锡熔;;人类肥胖相关新基因LYRM1多克隆抗体的制备及鉴定[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

3 陈波;钱，

本文编号：821894