五种食源性致病菌多重PCR的条件优化和检出限分析
本文关键词：五种食源性致病菌多重PCR的条件优化和检出限分析
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【摘要】：目的对沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌和福氏志贺菌5种食源性致病菌的多重PCR反应条件进行优化并分析方法的DNA检测限。方法根据沙门菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的16S rDNA基因、大肠杆菌O157∶H7的eaeA基因、单核增生李斯特菌的hlyA基因和福氏志贺菌的ipaH基因设计5对特异性引物进行多重PCR,对反应条件包括镁离子浓度、引物浓度和退火温度进行优化试验,并确定该检测方法的检出限。结果最佳反应条件为金黄色葡萄球菌、沙门菌和福氏志贺菌引物浓度为0.25μmol/L,单核增生李斯特菌引物浓度为0.4μmol/L,大肠杆菌O157∶H7引物浓度为0.3μmol/L,Mg2+浓度为2.25 mmol/L,退火温度为60℃;在此条件下金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌的多重PCR的DNA检出限分别为6.4、32、32、800和160 pg。结论通过对5种引物的PCR条件进行优化和检出限的分析,为食品中该5种致病菌的快速检测奠定基础,对实际应用具有指导意义。
【作者单位】： 西南民族大学生命科学与技术学院;
【关键词】： 多重PCR 扩增条件 优化 检出限 食源性致病菌 食品安全
【基金】：教育部新世纪人才支持计划(NCET-11-0847) 国家自然科学基金(31371781) 国家科技重大专项(201203009)
【分类号】：R346
【正文快照】： 世界范围内,食物中毒事件每年都在频繁暴发。据统计资料显示,在病原清楚的暴发事件中,我国由微生物引起的食源性疾病暴发事件数和患者数最多,分别占42.4%和58.2%。可见,由微生物引起的食源性疾病是目前主要的食品安全问题[1]。其中,又以沙门菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(St
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