福氏志贺菌5a型M90T株GAPDH蛋白多克隆抗体的制备和鉴定

发布时间：2017-09-10 23:08

  本文关键词：福氏志贺菌5a型M90T株GAPDH蛋白多克隆抗体的制备和鉴定

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【摘要】：目的制备高效的福氏志贺菌5a M90T3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的多克隆抗体,并对其特异性进行评价。方法提取M90T的全基因组,采用PCR法扩增M90T中的基因gapA克隆到原核表达载体pET-24中,重组质粒转入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,条件优化后纯化GAPDH-His融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体。Western blot法、ELISA鉴定获得的抗血清。结果成功构建了原核表达载体pET24a-gapA,通过一系列诱导条件的优化,确定可溶性条件为30℃、1 mmol/L IPTG诱导2 h。用纯化的融合蛋白GAPDH-His作为抗原免疫小鼠制备多克隆抗体,Western blot法、ELISA证明多克隆抗体制备成功。结论成功制备了福氏志贺菌5a M90T特异性的小鼠多克隆抗体。
【作者单位】： 内蒙古农业大学兽医学院;军事医学科学院生物工程研究所;
【关键词】： 福氏志贺菌aMT -磷酸甘油醛脱氢酶 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(30970122)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 志贺氏菌,俗称痢疾杆菌,定植在人的小肠上皮细胞内引起人类腹泻。报道称,每年全球约有1.6亿人感染,多数发生在卫生条件差的发展中国家[1-2]。在福氏志贺菌(Shigella flexneri)5a M90T中,3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)是糖酵解的重要酶之

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 龚益熊;廖翔;朱力;吴兰;周晓巍;梁龙;黄培堂;;双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物[J];生物技术通报;2011年09期

2 王羽;周围;廖翔;魏波;冉金宝;高原;呼和巴特尔;岳俊杰;梁龙;;弗氏志贺菌5a型M90T株ClpB蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化[J];生物技术通讯;2012年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 冉金宝;廖翔;周围;王羽;魏波;高原;岳俊杰;梁龙;王纯洁;;弗氏志贺菌M90T株毒力相关膜蛋白复合物组成基因缺失突变体的构建[J];生物技术通讯;2012年06期

2 王羽;周围;廖翔;魏波;冉金宝;高原;呼和巴特尔;岳俊杰;梁龙;;弗氏志贺菌5a型M90T株ClpB蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化[J];生物技术通讯;2012年06期

3 王羽;周围;廖翔;高原;戴红梅;岳俊杰;梁龙;呼和巴特尔;;志贺菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表达、纯化及多克隆抗体制备[J];中国免疫学杂志;2013年10期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 冉金宝;福氏志贺氏菌M90T毒力相关膜蛋白复合物组成蛋白基因缺失突变体的构建[D];内蒙古农业大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 龚益熊;廖翔;朱力;吴兰;周晓巍;梁龙;黄培堂;;双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物[J];生物技术通报;2011年09期

【相似文献】

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1 苏洁;王斌;鲁晓晴;赵巍;闫志勇;钱冬萌;丁守怡;宋旭霞;杨丽;刘海燕;;D2蛋白酶间接ELISA检测方法的建立[J];中国生物制品学杂志;2010年02期

2 李淑娟;牛育鸿;;金磁微粒介导的抗六聚组氨酸多克隆抗体的纯化[J];陕西科技大学学报(自然科学版);2010年05期

3 宋希云,高文淑,刘新,刘广田,黄铁城,夏日升;利用鸡蛋黄制备普通小麦高分子量谷蛋白亚基多克隆抗体的研究[J];农业生物技术学报;1996年03期

4 谢忠平,崔萍芳,宋霞,李华,龙润乡,洪超,熊秋霞,李文忠,李琦涵;利用HCV多表位复合抗原制备高效价抗体[J];中国生物制品学杂志;2005年04期

5 侯秋莲,王静,刘胜旺,孔宪刚,韩宗玺,冉多良;鹅细小病毒vp2基因片段在原核系统中的表达及多克隆抗体的制备[J];中国病毒学;2005年04期

6 王弘s，

本文编号：827161