细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析

发布时间：2017-09-12 00:16

  本文关键词：细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析

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【摘要】：目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒沙门氏菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg95,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组菌Eg95蛋白的表达情况。将重组菌St-Eg95体外培养传10代,每隔一代提取质粒,利用PCR鉴定重组质粒的稳定性。BALB/c小鼠30只,随机均分为6组,其中4组分别经口灌胃给予St-Eg95 1×109、1×1010、1×1011和1×1012 cfu/ml,100μl/只,余下2组分别经口灌胃给予等体积野生型沙门氏菌1×107 cfu/ml和PBS,常规饲养30 d,观察生存情况。另取15只BALB/c小鼠,均分为3组,分别为St-Eg95免疫组、阴性对照组和空白对照组,St-Eg95组和阴性对照组按5×1010cfu/ml剂量的重组菌和阴性菌分别经口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,间隔2周。分别于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清。用细粒棘球蚴Ig G抗体检测试剂盒(间接ELISA)检测Eg95蛋白的Ig G抗体滴度。于末次免疫后6周处死小鼠,用噻唑蓝(MTT)法检测特异性脾淋巴细胞增殖活性。结果经PCR和酶切鉴定表明,重组质粒p YA3341-Eg95构建成功,在重组菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表达,相对分子质量(Mr)约为18 000,与预期大小一致。重组菌传10代后,PCR仍可扩增到约486 bp的Eg95基因片段。安全性实验结果显示,灌胃给予重组菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活动正常;给予野生型沙门氏菌的小鼠均于4 d后死亡。间接ELISA检测结果显示,末次免疫后2周St-Eg95组小鼠特异性Ig G抗体水平即明显升高,显著高于阴性对照组和空白对照组(P0.05);末次免疫后4周抗体水平达到最高值,约1∶1 700。小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示,末次免疫后6周,St-Eg95组小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI值)达到1.94±0.15,显著高于阴性对照组(1.14±0.12)和空白对照组(1.03±0.03)(P0.05)。结论构建了能稳定表达细粒棘球蚴Eg95蛋白的口服减毒沙门氏菌重组株,并具有良好的免疫原性和安全性。
【作者单位】： 宁夏医科大学实验动物中心;
【关键词】： 细粒棘球蚴 Eg 减毒沙门氏菌 免疫原性
【基金】：宁夏自然科学基金(No.NZ12199) 宁夏卫生厅项目(No.2013125) 宁夏医科大学校级面上项目(No.XM2012032)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 细粒棘球蚴病,是由细粒棘球绦虫(Echinococ-cus granulosus)的幼虫引起的一种人兽共患寄生虫病[1,2]。宁夏是我国棘球蚴病的高发区之一,2011年中国疾病预防控制中心网络直报系统数据统计分析结果显示,宁夏报告的棘球蚴病例数占全国总报告病例数的10.8%(324/3 013)[3]。通过疫

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本文编号：833919