双重实时荧光PCR检测副溶血性弧菌和创伤弧菌方法的建立

发布时间：2017-09-12 12:22

  本文关键词：双重实时荧光PCR检测副溶血性弧菌和创伤弧菌方法的建立

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【摘要】：目的建立双重实时荧光PCR检测副溶血性弧菌和创伤弧菌的方法。方法在Gen Bank数据库查找序列并比对后设计tdh和vvh A基因引物和探针。对PCR反应退火温度、引物、探针、Mg2+、Taq DNA聚合酶及d NTPs浓度进行优化,确定反应体系和反应条件,并对新建方法的特异性、灵敏度等方面进行分析,对模拟样品进行检测。结果建立了双重实时荧光PCR检测副溶血性弧菌和创伤弧菌的方法。该方法的特异性较好,检测限为103 CFU/ml。结论建立的双重荧光PCR方法可快速、灵敏、特异地检测副溶血性弧菌和创伤弧菌。
【作者单位】： 深圳市龙岗区疾病预防控制中心;
【关键词】： 副溶血性弧菌 创伤弧菌 实时荧光PCR
【基金】：深圳市科技计划项目(201203348)
【分类号】：R440;R378.3
【正文快照】： 近年来,致病性弧菌如霍乱弧菌(Vibriocholera)、副溶血性弧菌(V.parahaemolyticus)、创伤弧菌(V.vulnificus)及溶藻弧菌(V.alginolyticus)等已成为散发、流行性腹泻和食物中毒的重要病原菌[1]。特别是在我国沿海地区,副溶血性弧菌为最主要食物中毒病原菌,是重要的食源性致病菌

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 吴振龙,聂军,鲍慧宁,徐兵,王红;副溶血性弧菌耐热直接溶血毒素基因的克隆[J];第一军医大学学报;2001年02期

2 庞武贵;廖家武;全信斌;刘义威;;外环境霍乱弧菌疫源监测研究[J];华南预防医学;2007年06期

3 潘丽峰;傅慧琴;苏靖华;章红红;;2007-2009年原上海市南汇区副溶血性弧菌的检出情况分析[J];疾病监测;2010年09期

4 罗贤如;黄薇;张锦周;刘建平;王舟;潘柳波;范兴;张志航;;2006-2011年深圳市集体食堂食物中毒流行病学分析[J];热带医学杂志;2013年01期

5 郭建巍;马骢;;创伤弧菌实验室诊断的研究进展[J];中华检验医学杂志;2006年09期

6 龚玲芬;郁祝新;;副溶血弧菌和溶藻弧菌混合污染引起食物中毒的调查[J];职业与健康;2008年04期

7 金玉娟;甘丽萍;陈应坚;杨慧;;深圳市龙岗区副溶血性弧菌检出情况及血清型分析[J];职业与健康;2011年14期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吴彩云,蔡俊鹏,杨汝德,陈清,罗立新,吴后波,俞守义;双重PCR检测携带有tl和tdh基因的副溶血弧菌毒力菌株[J];水产科学;2004年05期

2 魏杰;郭建巍;马骢;朱玉真;孔路科;吴素香;;创伤弧菌溶血素基因的高效表达与鉴定[J];第四军医大学学报;2008年14期

3 马骢;郭建巍;郝秀红;蒋学兵;付凯飞;马学斌;刘敏;王珍光;王芳;;中国海域分离的创伤弧菌的致病性及其对抗生素的敏感性研究[J];第四军医大学学报;2009年06期

4 李志峰,聂军,戴迎春,陈清,俞守义;融合表达的副溶血弧菌不耐热性溶血毒素包涵体复性的研究[J];第一军医大学学报;2004年09期

5 宋曼丹;严纪文;朱海明;马聪;杨冰;赖蔚傮;王海燕;王建;;贝甲类海产品中创伤弧菌检验方法的探讨[J];华南预防医学;2012年01期

6 谢平;吴德仁;刘青华;沈智勇;梁健;彭莹;;北海市2006～2007年霍乱监测结果分析[J];华夏医学;2009年04期

7 朱雪兰;陈艳;刘秀梅;曹小红;;副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展[J];国外医学(卫生学分册);2007年04期

8 贾玲华;宁喜斌;;溶藻弧菌生物膜研究进展[J];安徽农业科学;2014年33期

9 徐丽,蔡俊鹏;菌落PCR方法的建立及其与常规PCR方法的比较[J];华南理工大学学报(自然科学版);2004年05期

10 石同幸;孙兰;王德东;钟嶷;黄汝明;;广州市水源水基本情况分析[J];热带医学杂志;2009年09期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 王志;九孔鲍鲍苗致病菌及潜在生物防治的研究[D];华南理工大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 刘敏;开放骨缺损海水浸泡感染后人工骨修复的实验研究[D];第四军医大学;2011年

2 李巧苹;副溶血弧菌耐热直接溶血素基因的克隆表达与鉴定[D];福建农林大学;2004年

3 魏杰;创伤弧菌溶血素基因在大肠杆菌中的高效表达和鉴定[D];兰州大学;2008年

4 李月婷;弧菌三联融合毒素基因表达及ELISA检测方法的建立[D];吉林大学;2008年

5 孔巧香;南美白对虾主要致病微生物安全预警技术研究[D];浙江海洋学院;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 阚飙;;霍乱监测的新问题[J];传染病信息;2006年01期

2 李海群,孙金福,丁明文;中国对虾育苗场弧菌病的诊断与防制[J];动物医学进展;2001年01期

3 徐红梅;沈安梅;;南汇区2000～2004年腹泻流行病学监测报告[J];中国公共卫生管理;2006年02期

4 林亦可;;水产品致病性弧菌调查报告[J];应用预防医学;2006年05期

5 陈强;鄢庆枇;马u!;;溶藻弧菌致病性研究进展[J];海洋科学;2006年08期

6 朱林英;潘丽峰;傅慧琴;黄红;;上海市南汇区致病性弧菌调查分析[J];疾病监测;2009年05期

7 袁月明;黄锐敏;;深圳市599株副溶血性弧菌血清学鉴定结果分析[J];中国热带医学;2010年12期

8 陈坤才;毛新武;景钦隆;刘建平;李海麟;;广州市2008年食物中毒监测分析[J];热带医学杂志;2009年11期

9 张淑红;王英豪;韩艳青;关文英;侯凤伶;申玉学;申志新;;2005-2007年河北省水产品副溶血性弧菌主动监测及耐药性研究[J];实用预防医学;2008年04期

10 刘秀梅,陈艳,王晓英,计融;1992～2001年食源性疾病暴发资料分析——国家食源性疾病监测网[J];卫生研究;2004年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 韩国伟;东莞市集体食堂食物中毒分析和预防对策研究[D];吉林大学;2007年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张凡非,杉山宽治,西尾智裕,卿田淑明,秋山真人;环境样品中病原性副溶血性弧菌高效检出法[J];中国卫生检验杂志;2002年03期

2 邹婉虹;福建省牡蛎食用中感染副溶血性弧菌的风险评估[J];中国水产;2003年01期

3 鲁晓晴,张超英;漂白粉杀灭副溶血性弧菌及其影响因素的实验研究[J];中国感染控制杂志;2004年01期

4 车光,蒋震羚,唐振柱,李秀桂,黄林,吕素玲,王红,方志峰,阮青,张洁宏,杨娟;2003~2004年广西海产品副溶血性弧菌污染调查[J];广西预防医学;2005年05期

5 程苏云;李恩民;张俊彦;朱敏;梅玲玲;;不同来源的副溶血性弧菌生物学特性研究[J];中国食品卫生杂志;2006年02期

6 马聪;严纪文;朱海明;宋曼丹;赖蔚傮;何冬梅;王海燕;杨冰;王建;王吉城;;2005年珠江三角洲地区生吃水产品中副溶血性弧菌污染调查[J];中国卫生检验杂志;2006年03期

7 姜明杰;李彩云;甘云;高洁;高群;卢国际;王翠华;;承德市餐馆饭店副溶血性弧菌污染情况调查[J];中国卫生检验杂志;2007年01期

8 张俊彦;梅玲玲;朱敏;张严峻;潘雪霞;石雅素;郑官增;;301份海水产品副溶血性弧菌定量检测分析[J];中国卫生检验杂志;2007年03期

9 李铭新;姜义霖;;副溶血性弧菌污染现状及快速检测[J];口岸卫生控制;2007年02期

10 胡玉山;王鸣;杜琳;江丽芳;邓志爱;刘俊华;候水平;林云万;莫自耀;;副溶血性弧菌流行群特异多重PCR鉴定[J];中国公共卫生;2007年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张凡非;杉山宽治;西尾智裕;乡田淑明;秋山真人;;检测环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的研究[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年

2 廖玉学;谢旭;扈庆华;;2012年深圳市副溶血性弧菌感染危险因素病例对照研究[A];2012深圳市预防医学会学术研讨会论文汇编[C];2012年

3 刘佛民;刘礼平;谭海玲;马聪;陈文胜;罗建波;;食品中副溶血性弧菌检测能力验证研究[A];2010广东省预防医学会学术年会资料汇编[C];2010年

4 冯立芳;孙伟杰;何珊珊;励建荣;;基于基因组水平发掘副溶血性弧菌的物种特异性检测靶点[A];中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2011年

5 程苏云;张俊彦;王赞信;童贵忠;石亚素;;海水产品副溶血性弧菌污染定量检测分析[A];应对突发公共卫生事件论坛论文集[C];2005年

6 李纯宗;王秋娥;连珠春;薛月华;;一起副溶血性弧菌引起的食物中毒[A];华东地区第二次急诊医学学术研讨会论文摘要汇编[C];1993年

7 张淑红;吴清平;张菊梅;;副溶血性弧菌特异性显色生化快速检测方法的研究[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年

8 方平楚;;副溶血性弧菌研究进展[A];2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会论文汇编[C];2007年

9 周桂莲;王淑真;杨宝兰;;鉴别副溶血性弧菌和溶藻弧菌致病与非致病性的动物试验方法[A];北京食品学会1982年年会论文（摘要）[C];1982年

10 马聪;;广东地区副溶血性弧菌暴发分离优势血清型菌株的分子特征[A];新发传染病研究热点研讨会论文集[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 衣晓峰;副溶血性弧菌最爱夏秋作乱[N];中国医药报;2007年

2 邹雪芹邋逄春展;龙口局：进口冻鱼中检出副溶血性弧菌[N];中国国门时报;2008年

3 通讯员 谢林 记者 江麓;生吃金枪鱼会中毒[N];医药导报;2007年

4 山东省莱州市慢性病防治院 郭旭光;雕花碟菜最不卫生[N];健康时报;2009年

5 全国12320管理中心副主任 李蓉;防中毒 吃海鲜时多用醋[N];健康报;2010年

6 中国消费者报 顾艳伟 李青山;海水鱼查出致病性副溶血性弧菌[N];中国消费者报;2005年

7 本报记者 肖玉保 实习生 吴铎思;贝类食品成为餐桌隐忧[N];工人日报;2004年

8 张博;科技尖兵[N];中国国门时报;2011年

9 本报记者 王峰;生吃海鲜防中毒[N];中国消费者报;2003年

10 中国消费者报 孙燕明;副溶血性弧菌导致79名老人群体性食物中毒[N];中国消费者报;2005年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 唐晓阳;水产品中副溶血性弧菌风险评估基础研究[D];上海海洋大学;2013年

2 姬华;对虾中食源性弧菌预测模型建立及风险评估[D];江南大学;2012年

3 巢国祥;副溶血性弧菌传播特征、O3：K6流行克隆分子生物学特性及多位点序列种群遗传研究[D];扬州大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 卢晓凤;蛤肉中副溶血性弧菌风险评估体系初探[D];山东农业大学;2007年

2 王宏萍;水产品中致病性副溶血性弧菌的检测[D];重庆医科大学;2009年

3 张凡非;海水海泥中病原性副溶血性弧菌时间分布及检出方法比较研究[D];山西医科大学;2006年

4 翁仕强;副溶血性弧菌特异性抗体的制备研究[D];上海海洋大学;2011年

5 侯立杰;重庆地区水产品中副溶血性弧菌的污染情况调查和分离株的毒力因素及药物敏感性研究[D];西南大学;2013年

6 庞文聪;二氢杨梅素对副溶血性弧菌的抑菌机理探讨[D];广东工业大学;2014年

7 齐学明;宁波市售血蚶中副溶血性弧菌污染分析及其膳食风险初步评价[D];浙江大学;2013年

8 吴伟华;几种天然食用成分对副溶血性弧菌的协同抑菌效果及其损伤机理[D];上海海洋大学;2013年

9 李沁;不同环境样品中副溶血性弧菌毒力基因表达差异研究及副溶血性弧菌活菌定量方法的建立[D];上海海洋大学;2013年

10 高梦莎;臭氧对副溶血性弧菌灭活机制的探索研究[D];浙江工商大学;2013年

，

本文编号：837214