一种高纯度和高活力的大鼠脑微血管内皮细胞的提取及原代培养方法

发布时间：2017-09-12 15:44

  本文关键词：一种高纯度和高活力的大鼠脑微血管内皮细胞的提取及原代培养方法

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【摘要】：目的建立一种纯度和活力较高、简单实用的大鼠脑微血管内皮细胞分离及原代培养方法,为建立体外血脑屏障提供材料。方法采集1-2周SD大鼠大脑皮质,应用Ⅱ型胶原酶和分散酶/胶原酶连续消化法,筛网过滤法及20%BSA和44%Percoll两次梯度离心法获得脑微血管段后,接种于培养瓶中进行原代培养,采用倒置显微镜对所培养的细胞进行形态学观察,以Ⅷ因子相关抗原免疫染色法对其进行鉴定。结果体外培养2 h后,微血管内皮细胞爬出血管段进行贴壁生长,3~4 d呈典型的铺路卵石样结构,Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达呈阳性,可见细胞胞质呈棕色,阳性细胞占99%以上。结论该方法能成功地分离并培养出高纯度的大鼠脑微血管内皮细胞,对体外血脑屏障的建立以及脑微血管内皮细胞的生物学特性和功能的深入研究具有重要意义。
【作者单位】： 贵阳医学院民族药与中药开发应用教育部工程研究中心;贵州省药物制剂重点实验室;
【关键词】： 大鼠 脑微血管内皮细胞 原代培养 血脑屏障 形态学 免疫染色
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No 81260473) 贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目(No黔科合中药字2012-3013号) 贵州省优秀青年科技人才培养对象专项基金(No 2013-45号) 贵州省中药现代化科技产业研究开发专项(No黔科合重G字[2013]4001)
【分类号】：R363
【正文快照】： 血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)是存在于血液与脑组织间的一道生理屏障,对于维持中枢神经系统的稳定起着重要作用。它的存在使处于循环中的内源性和外源性物质无法轻易透过其进入大脑组织,从而保护大脑不被血液内的微生物和毒素伤害[1],但同时也导致绝大多数药物无法进入

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 刘恺鸣;迟路湘;鲁向辉;何国祥;;大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养[J];第三军医大学学报;2007年20期

2 田林郁;李胜富;周东;;大鼠脑微血管内皮细胞的分离、培养及不同纯化方法的比较[J];四川大学学报(医学版);2010年05期

3 鹿文葆;秦伟伟;刘淑英;李宏伟;修瑞娟;;大鼠脑微血管内皮细胞的纯化培养与鉴定[J];中国脑血管病杂志;2011年10期

4 王义宝;刘云会;刘丽波;王萍;马永会;;大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养及其生物学行为初步探讨[J];神经解剖学杂志;2006年02期

5 李正伟;卞红强;罗正利;王胜;王煜;陈劲草;;大鼠脑皮质微血管内皮细胞的原代培养和鉴定[J];华中科技大学学报(医学版);2012年05期

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7 吴秀芹;梅晓云;吴颢昕;李洋;李辉;;大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定[J];中国实验方剂学杂志;2011年03期

8 王艳;汪宁;林辰雨;;脑微血管内皮细胞的原代培养方法概述[J];中国药理学通报;2013年02期

9 陈剑鸿;刘松青;王章阳;陈勇川;孙凤军;赵映兰;;药物实验血脑屏障体外模型的建立及评价[J];中国医院药学杂志;2008年07期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘恺鸣;迟路湘;鲁向辉;;缺氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞对共培养的人间充质干细胞分化的影响[J];第三军医大学学报;2008年07期

2 李s，

本文编号：838106