慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用

发布时间：2017-09-14 17:28

  本文关键词：慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用

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【摘要】：目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达。
【作者单位】： 泸州医学院附属医院新生儿科;
【关键词】： 肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin) 慢病毒载体 A细胞 基因表达
【基金】：中华儿科杂志第二届双鹤珂立苏科研基金(2010年) 四川省教育厅科研基金(08ZA150) 四川省卫生厅科研基金(90191)
【分类号】：R346
【正文快照】： 新生儿特别是早产儿的救治过程,常需要吸入高体积分数氧(高氧),部分患儿在早期易导致急性肺损伤,继而可能发展至肺纤维化及支气管肺发育不良,严重影响患儿生活质量[1]。目前,高氧肺损伤的发病机制尚未阐明,研究显示,在高氧环境下线粒体发生氧化应激反应,炎性细胞激活[2],产生

【参考文献】

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【共引文献】

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【相似文献】

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本文编号：851344