口服CD226 DNA疫苗对小鼠免疫功能的影响

发布时间：2017-09-14 22:07

  本文关键词：口服CD226 DNA疫苗对小鼠免疫功能的影响

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【摘要】：目的制备口服CD226 DNA疫苗,观察该疫苗对小鼠免疫功能的影响。方法以质粒CD226-PCR2.1-ToPo为模板,PCR扩增CD226基因,克隆至pcDNA3.1载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-CD226,利用脂质体LipofectamineTM2000瞬时转染CT-26细胞株,采用RT-PCR法、Western blot法、流式细胞术检测CD226基因在CT-26细胞中的表达。将质粒pcDNA3.1-CD226用脂质体Lipofectamine TM2000包裹制成CD226 DNA疫苗(100μg质粒/100μl脂质体),经灌胃免疫C57BL/6小鼠,实验分CD226疫苗组、pcDNA3.1组和生理盐水组,流式细胞术检测CD226在小鼠脾细胞中的表达;还原酶法检测NO分泌水平;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤活性;ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子(IL-2、IL-4、IFNγ和TNF-α)分泌水平;Real-time PCR法检测肠黏膜组织内细胞因子表达水平。结果质粒pcDNA3.1-CD226经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒pcDNA3.1-CD226转染CT-26细胞的转染率为32.14%,转染的CT-26细胞检测到CD226蛋白表达。CD226疫苗组CD226 CD4+T细胞的绝对数、NK细胞杀伤活性、NO分泌水平、脾细胞培养上清中TNF-α、IFNγ和IL-2分泌水平、肠黏膜组织内TNF-α和IFNγ基因mRNA水平均明显高于pcDNA3.1组和生理盐水组(P0.05);而CD226疫苗组脾细胞培养上清中IL-4分泌水平及肠黏膜组织内IL-2和IL-4基因mRNA水平,与pcDNA3.1组和生理盐水组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 CD226DNA疫苗经灌胃免疫,可诱导小鼠全身Th1型免疫应答增强和肠道局部部分Th1型免疫应答增强。
【作者单位】： 中国医科大学基础医学院免疫教研室;辽宁卫生职业技术学院免疫教研室;
【关键词】： CD DNA疫苗 口服 免疫应答
【基金】：国家自然科学基金项目(31270972) 辽宁省科学技术计划项目(2011415052-1)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： CD226分子又称为血小板T细胞活化抗原l(platelet and T cell activation antigen 1,PTA1),主要表达于活化的T细胞、NK细胞和血小板等。CD226与其配体CDl55和CD112相互作用,参与血小板凝集、巨核细胞分化、内皮细胞黏附、CTL细胞和NK细胞的细胞杀伤等过程[1]。在发现早期CD226

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 王晓梦;于津浦;李慧;于文文;任秀宝;曹水;;IL-2+IL-15组合培养方案对乳腺癌患者外周血中NK细胞体外扩增的效果[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2013年06期

2 张晓燕;余琦;白雪娟;梁艳;李宁;吴雪琼;;结核病DNA疫苗的研究进展[J];医学综述;2014年11期

3 李岩;桑力轩;朱俊丰;杨芳莉;王大南;李胜军;孙逊;吕昌龙;;口服结核Ag85A-CD226 DNA疫苗在小鼠脾与肠道的表达水平检测[J];微生物学免疫学进展;2014年03期

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5 赵霞;陈茜;刘U喡，

本文编号：852587