雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤

发布时间：2017-09-17 10:17

  本文关键词：雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤

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【摘要】：目的:建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型,观察雌激素及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用。方法:原代培养小鼠大脑皮层神经细胞,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫组化染色鉴定神经元的纯度。建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。用前期实验中已构建成功的ERα重组慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞。实时荧光定量PCR和Western blotting检测ERαmRNA和蛋白表达水平。实验分为3组:(1)对照组:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞;(2)雌激素组:用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞;(3)慢病毒组:用V-ERα-RFP-flag感染经谷氨酸诱导的神经细胞。流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组神经细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的变化。结果:成功原代培养神经细胞,经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90%。成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型。MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神经细胞72 h后,在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达,与对照病毒相比,能增加神经细胞中ERαmRNA和蛋白表达水平(P0.01)。与对照组相比,雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低(P0.05),且实时荧光定量PCR结果显示,雌激素组和慢病毒组的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表达降低(P0.05),免疫荧光实验结果提示NMDAR1和VGLUT1阳性的细胞数减少(P0.01)。结论:雌激素和ERα能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应,该保护作用可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现。
【作者单位】： 贵州省人民医院神经内科;临沂市妇幼保健院儿科;贵州省人民医院小儿内科;
【关键词】： 雌激素 雌激素受体α 谷氨酸 神经元
【基金】：贵州省科技厅攻关项目(No.黔科合sy[2009]3054) 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金资助项目(No.黔省专合字[2010]86)
【分类号】：R363
【正文快照】： 谷氨酸(glutamate,Glu)广泛分布于哺乳动物中枢神经系统(central nervous system,CNS),是脑内含量最丰富的兴奋性神经递质,在突触可塑性和介导突触兴奋性活动等方面发挥着重要的作用。Glu的受体,特别是N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)在突触可塑

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【共引文献】

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本文编号：868830