电穿孔介导马尔尼菲青霉转化体系的建立和优化

发布时间：2017-09-18 07:34

  本文关键词：电穿孔介导马尔尼菲青霉转化体系的建立和优化

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【摘要】：目的建立和优化马尔尼菲青霉电穿孔转化体系,为其基因功能研究提供良好平台。方法直接使用马尔尼菲青霉缺陷株SPM4(pyrG-,niaD-)萌发孢子进行电穿孔转化,并通过改变孢子龄、孢子萌发时间、质粒浓度、电场强度等影响因素对体系进行优化。结果适合SPM4电穿孔转化条件为:孢子龄为6 d,孢子萌发时间为4 h,电场强度为5 kV/cm。上述条件下分别使用1μg环状或线性化质粒DNA转化SPM4,平均可得到21个和13个转化子。结论马尔尼菲青霉电穿孔转化效率高,重复性好,针对SPM4萌发孢子,环状质粒较线性化质粒电穿孔转化效率高。
【作者单位】： 中山大学孙逸仙纪念医院;贵阳医学院基础医学院;
【关键词】： 马尔尼菲青霉 萌发孢子 电穿孔
【基金】：国家自然科学基金(81171545)
【分类号】：R379.9
【正文快照】： 马尔尼菲青霉是一种双相型真菌,室温培养时以菌丝形态生长,37℃培养或感染人体后以酵母细胞形态生长,感染人体后可引起一种严重的深部真菌病,该病在免疫受损患者尤其是HIV感染患者中多见[1]。有研究表明,马尔尼菲青霉的致病性与acuD、hsp 70和hsp 90等基因有关[2-4]。通过克隆

【参考文献】

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本文编号：874229