酵母双杂交筛选与CVB3 3A相互作用的人心脏蛋白

发布时间：2017-09-19 10:24

  本文关键词：酵母双杂交筛选与CVB3 3A相互作用的人心脏蛋白

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【摘要】：目的以CVB3非结构蛋白3A为诱饵,从人心脏cDNA文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法构建pGBKT7-3A重组质粒,Western Blot检测3A融合蛋白的表达;利用酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库,经PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等实验将阳性克隆归类,并通过测序、相似性比对分析和回返配合实验去除假阳性蛋白。结果成功构建诱饵质粒pGBKT7-3A,Western Blot结果表明,pGBKT7-3A重组质粒在酵母菌中成功表达3A融合蛋白;经双杂交筛选和回返配合实验,获得了7个相互作用的蛋白,分别为:兰尼碱受体2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信号肽酶2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24protein transport domain containing 4,TMED4),细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),细胞色素c氧化酶亚基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脱氢酶亚基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD)。结论应用酵母双杂交技术,以CVB3 3A为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得7种不同的阳性基因:RyR2、SPCS2、TMED4、COX1、COX3、MYH7和SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能。
【作者单位】： 南昌大学医学院微生物学教研室;南昌大学医学院检验系;南昌大学医学院临床医学系;南昌大学医学院药学系;
【关键词】： 酵母双杂交 CVB A
【基金】：国家自然科学基金(No.81160196,No.30660010) 江西省青年科学家培养项目年度计划资助(20133BCB23005) 江西省研究生创新专项资金项目(No.YC2012-S020)联合资助~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 柯萨奇B3病毒归类于小RNA病毒科肠道病毒属,能引起人类病毒性心肌炎、无菌性脑膜炎、胰腺炎,甚至新生儿死亡等多种疾病。肠道病毒基因组为单股正链RNA,长约7.5kb,两端为非编码区,中间为连续开放读码框,编码一个多聚蛋白。多聚蛋白经酶切后形成病毒的结构蛋白和非结构蛋白,3A是

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘发娣;余克花;罗达亚;徐秋芳;莫冰;罗军;刘晶星;黄孝天;;酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白[J];中国人兽共患病学报;2009年10期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 蔡兴怀;江海洋;;植物LIM蛋白家族研究进展[J];黑龙江农业科学;2011年06期

2 金桂林;莫冰;刘发娣;徐秋芳;刘昕;应颖;赵颖洁;罗军;黄孝天;;CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制研究[J];中国人兽共患病学报;2012年06期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 李映新;17-甲氧基-7-羟基-苯骈呋喃查尔酮对心肌细胞离子通道作用的研究[D];广西医科大学;2013年

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1 苏正秀;盐对CRF大鼠的心脏磷酸化蛋白质组及OVLT内RAS的影响[D];南方医科大学;2013年

2 吴瑶;缬沙坦对心衰幼鼠心肌细胞内钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ干预研究[D];重庆医科大学;2013年

3 金桂林;CVB3 VP1与宿主蛋白MAT1相互作用的研究[D];南昌大学医学院;2013年

4 张林;发形霞水母触手提取物的心脏毒性及其作用机制探讨[D];第二军医大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 徐薇,沈燕,陈瑞珍,熊思东;含融内体多肽的新型B3型柯萨奇病毒DNA疫苗对小鼠病毒性心肌炎的预防作用[J];中华医学杂志;2004年04期

2 黄孝天,陈洪,吴峗,陈宏新,刘晶星;重组柯萨奇B3病毒VP1基因的穿梭表达载体的构建及鉴定[J];中国人兽共患病杂志;2004年05期

3 黄孝天,陈宏新,陈洪,吴斌贝,刘晶星;柯萨奇病毒B3型VP1基因在酿酒酵母中的表达[J];中国人兽共患病杂志;2005年07期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 施琼;翁亚光;;酵母双杂交系统筛选Mps1相互作用蛋白[J];重庆医科大学学报;2006年06期

2 李铁强;吴永英;范洪臣;王立群;;酵母双杂交系统研究进展[J];生物信息学;2008年01期

3 孙玉宁,李春荣,靳更林;酵母质粒PCR扩增及酶切在酵母双杂交中的运用[J];承德医学院学报;2005年03期

4 刘卉;潘欣;李慧艳;张佩景;李卫华;张学敏;周涛;;应用酵母双杂交筛选与CUEDC2相互作用的蛋白质[J];生物技术通讯;2007年05期

5 武君;沈秀张;林吉进;;蛋白质与蛋白质相互作用研究技术[J];中国分子心脏病学杂志;2008年02期

6 王，

本文编号：881089