RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制

发布时间：2017-09-20 04:29

  本文关键词：RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制

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【摘要】：目的构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞。观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护机制。方法针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列,合成慢病毒LV-si-OLR1最佳干扰序列,测定滴度。转染人脐静脉内皮细胞96 h后,通过荧光显微镜观察转染效率,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测LOX-1的抑制效率。转染72 h后加入150 mg/L ox-LDL处理24 h;噻唑蓝比色法检测细胞存活率;硝酸还原酶法检测各组内皮细胞培养液一氧化氮(NO)的含量;Western blot检测各组细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、RhoA、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)的表达。结果测序结果证实,靶向人LOX-1的干扰慢病毒载体构建成功,包装后慢病毒滴度为6×1011TU/L。转染组与未转染组比较,LOX-1 mRNA与蛋白的表达明显减少(P0.01)。与正常对照组相比,ox-LDL处理组能明显减低内皮细胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达(P0.05);与ox-LDL处理组相比,干扰LOX-1表达后对ox-LDL诱导的内皮细胞存活率、NO生成量减低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表达增高均有明显抑制作用(P0.05)。结论干扰LOX-1表达,对ox-LDL诱导内皮细胞引起的ICAM-1、MCP-1高表达和RhoA/Rho激酶信号通路的激活及细胞存活率、NO生成量的减低均有明显抑制作用,起到对内皮细胞损伤的保护作用。本研究为LOX-1作为靶基因治疗动脉粥样硬化提供了实验依据。
【作者单位】： 辽宁医学院附属第一医院心内科;辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室;莘县人民医院;
【关键词】： 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 RNA干扰 细胞间黏附分子 单核细胞趋化蛋白 一氧化氮 RhoA/Rho激酶
【基金】：辽宁省科技厅社会发展攻关计划(2011225015) 辽宁医学院校长基金-奥鸿博泽研究生科研创新基金
【分类号】：R363
【正文快照】： 动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是一种炎症性疾病,其病因还没有被完全阐明,内皮功能障碍目前被认为是启动As最重要的步骤之一[1]。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)是As发病的主要危险因素之一,可诱导内皮细胞损伤,在As的发生发展中起着重要作

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：885923