基于独特型-抗独特型玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA检测方法的建立

发布时间：2017-09-21 02:29

  本文关键词：基于独特型-抗独特型玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA检测方法的建立

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【摘要】：目的建立基于独特型-抗独特型玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)间接竞争ELISA检测方法,并进行验证。方法采用Protein G亲和层析法纯化ZEN的β型抗独特型单抗1D5(Ab2β-1D5)腹水;以ZEN单抗Fab片段包被酶标板,Ab2β-1D5为一抗,建立ZEN的竞争ELISA检测方法,绘制标准抑制曲线,根据回归方程计算半数抑制浓度(IC50),并确定检出限(IC10)及线性范围。以ZEN类似物呕吐毒素、伏马毒素、赭曲霉素A代替ZEN作为竞争抗原,用建立的方法进行检测,验证方法的特异性;配制6个浓度的ZEN溶液(20、30、40、50、60和75 ng/ml),用建立的方法进行检测,计算试验内及试验间回收率和变异系数(CV),验证方法的准确性和精密性。结果 Ab2β-1D5单抗的纯化效果较好,浓度为4 mg/ml,效价为1∶6×104;ZEN单抗Fab片段的最佳包被浓度为1μg/ml。建立的ZEN竞争ELISA检测方法的线性回归方程为:y=-34.099 x+81.857,R2=0.994 4,IC50为8.60 ng/ml,IC10为0.58 ng/ml,线性范围为0.58~128.03 ng/ml;该方法检测ZEN类似物伏马毒素、赭曲霉素A和呕吐毒素的交叉反应率均小于0.01%;检测不同浓度ZEN的试验内平均回收率在98.65%~113.45%之间,试验间平均回收率在82.96%~98.00%之间;试验内CV值在0.48%~6.40%之间,试验间CV值在0.94%~8.27%之间。结论应用ZEN单抗的Fab片段和ZEN的β型抗独特型单抗建立了ZEN的间接竞争ELISA检测方法,该方法特异性较强,准确性和精密性良好,且成本较低,快速简便,易于标准化,适用于样品的大量筛选。
【作者单位】： 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室;
【关键词】： 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 Fab片段 β型抗独特型单抗 间接竞争酶联免疫吸附测定
【基金】：广东省科技计划项目(2012A020200003) 暨南大学国家级大学生创新创业训练计划项目(1210559005)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)又称F-2毒素,是一种类雌激素样真菌毒素,具有较强的生殖毒性和致畸作用,可引起动物发生雌激素亢进症,导致动物不孕或流产,给畜牧业带来很大的经济损失。ZEN除具有较强的雌激素活性外,还具有细胞毒性[1-2]、免疫毒性[3-4]、肝毒性[5]、潜在致癌性

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本文编号：891855