分泌型毕赤酵母人全长抗体库的构建与鉴定

发布时间：2017-09-21 05:14

  本文关键词：分泌型毕赤酵母人全长抗体库的构建与鉴定

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【摘要】：目的基于N-糖基化部分改造毕赤酵母构建表达分泌型人全长抗体库。方法基于酵母分泌型表达载体pPICZαA构建双启动子串联表达重链和轻链恒定区基因的载体pPICZαA-C H-C L,经基因序列分析和Western blot分析验证。设计44对简并引物经逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增获得轻链可变区V L和重链可变区V H基因库。通过PCR将其插入上述恒定区表达载体构建全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L。将该库电转化N-糖基化部分改造后宿主菌株GS115Y。随机挑取20个平板克隆进行菌液PCR鉴定、基因分析,并提交IgBLAST-imgt数据库鉴定抗体库正确性与多样性。结果获得表达重链和轻链恒定区的表达载体pPICZαA-C H-C L,并在此基础上初步获得全长抗体表达库pPICZαA-V H-C H-V L-C L,库容量为105。结论成功构建了分泌型N-糖基化毕赤酵母人全长抗体库。
【作者单位】： 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室;军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室;
【关键词】： 毕赤酵母 人全长抗体 N-糖基化改造 抗体库 分泌表达
【基金】：北京市基金(5113034)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 人源化抗体和完全人源抗体是治疗性单克隆抗体(mAb)的研发趋势,近年来,基于人源非免疫抗体库筛选抗体技术因其简单、便捷,可以同时实现针对多种抗原的抗体批量化制备等优势,成为制备人源抗体的研究手段。目前人源抗体筛选技术主要依赖噬菌体抗体库技术[1],但后续生产仍要依赖

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 王丁丁;许天敏;余丽江;苏曼曼;黄树林;宿晓云;陈磊;颜炜群;;应用毕赤酵母分泌表达筛选人抗狂犬病毒抗体scFv-Fc[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期

2 常亮;刘晓志;孟雅娟;马志s，

本文编号：892569