金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体的原核表达和免疫学活性

发布时间：2017-09-21 06:00

  本文关键词：金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体的原核表达和免疫学活性

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【摘要】：目的原核表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)α-溶血素(α-hemolysin,Hla)及其突变体,并检测其免疫学活性。方法采用PCR法从S.aureus中扩增hla基因,将该基因克隆至原核表达载体p ET28a中,构建重组表达质粒p ET28a-hla,并利用点突变试剂盒进行突变,获得重组质粒p ET28a-hlaH35L。将两种重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;表达的重组蛋白经Ni-NTA亲和层析和CM离子交换层析纯化后,检测其溶血活性、免疫血清的抑制溶血活性及HlaH35L蛋白的免疫保护作用。结果重组表达质粒p ET28a-hla经双酶切和测序证明构建正确;重组质粒p ET28a-hlaH35L的测序结果显示,第35位氨基酸突变位点与设计相符。表达的Hla和HlaH35L蛋白相对分子质量约为36 000,均为可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的50%,纯化后纯度均在90%以上。Hla具有溶血活性,溶血比活为152 HU/mg;HlaH35L无溶血活性;抗Hla和抗HlaH35L血清均具有抑制Hla溶血的活性;在小鼠滴鼻攻击模型中,HlaH35L具有一定的保护作用。结论成功在大肠埃希菌中表达了具有良好免疫学活性的Hla及其突变体HlaH35L,为筛选S.aureus候选疫苗组分奠定了实验基础。
【作者单位】： 上海生物制品研究所有限责任公司;
【关键词】： 金黄色葡萄球菌 α-溶血素 原核细胞 基因表达 溶血活性 免疫保护
【分类号】：Q786;R392-33
【正文快照】： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一种革兰阳性条件致病菌,广泛分布于自然界。S.aureus是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎,甚至败血症、脓毒症等全身感染。S.aureus的毒力因子主要包括荚膜多糖、黏附素、

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