基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立

发布时间：2017-09-21 15:06

  本文关键词：基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立

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【摘要】：滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA(cccDNA)耐药突变分析等研究。为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法。通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA。然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定。应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性。该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础。
【作者单位】： 桂林医学院生物化学与分子生物学教研室;
【关键词】： 滚环扩增 鸭乙型肝炎病毒 共价闭合环状DNA
【基金】：广西自然科学基金项目2012GXNSFAA053146资助
【分类号】：R373.21
【正文快照】： 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA,cccDNA)是病毒复制、持续感染以及抗病毒药物停用后病情反复的关键因素[1-2]。检测病毒的cccD-NA可了解病毒感染状态及传染性,评价药物疗效并帮助监测机体病毒的清除程度。然而,既往检测H

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本文编号：895246