小鼠成纤维样滑膜细胞原代培养的影响因素研究

发布时间：2017-09-22 11:30

  本文关键词：小鼠成纤维样滑膜细胞原代培养的影响因素研究

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【摘要】：目的基因敲除小鼠已广泛用于关节疾病的研究中。文中探讨小鼠关节处理方式、消化酶种类及胶原酶消化时间3种因素对获取原代成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)数量的影响。方法将12只雄性SPF级小鼠,采用打开关节(6只)与不打开关节(6只)的方法处理双后肢,使用Ⅳ、Ⅱ型胶原酶消化分离原代细胞,差速消化法逐代纯化FLSs。倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞种类、活力与纯度。结果不打开关节处理获得的FLSs数量[(24933±503)个]显著高于打开关节处理获得的数量[(19133±115)个],差异有统计学意义(P0.05);连续收集消化单支后肢1~7h细胞悬液,FLSs数分别为(700±300)、(600±100)、(15200±900)、(5100±800)、(2700±300)、(900±200)、(300±100)个,以3 h的FLSs数量最多。Ⅳ型胶原酶消化所得FLSs细胞总数[(24900±500)个]明显高于Ⅱ型胶原酶[(18100±400)个],差异有统计学意义(P0.05)。结论消化培养小鼠原代FLSs,建议不打开关节,使用Ⅳ型胶原酶消化,取2~6h消化的细胞悬液进行后续培养。
【作者单位】： 遵义医学院免疫学教研室;成都医学院第一附属医院骨科;成都医学院免疫学教研室;
【关键词】： 成纤维样滑膜细胞 体外培养 细胞鉴定 小鼠
【基金】：国家自然科学基金(81273530,81202363,81302786) 四川省高校科研创新团队课题(13TD0028)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 0引言成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLSs)是组成滑膜层的最大细胞群体,在维持关节正常生理功能和内环境稳态方面发挥重要作用[1]。异常增生活化的FLSs在关节病变中起关键性作用,其已广泛应用于关节疾病发病机制的研究中[2]。目前已建立了较为成熟的体外人[3，

本文编号：900574